哈維氏弧菌硫氧還蛋白還原酶在大腸桿菌中的表達(dá)及對大菱鲆免疫保護(hù)作用.pdf

1、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是一種革蘭氏陰性的海洋細(xì)菌,廣泛分布于海洋環(huán)境及海洋生物,能引起海水魚類及其它養(yǎng)殖動物發(fā)病,是世界上許多國家和地區(qū)養(yǎng)殖對蝦和魚類的致病菌,也是我國海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類弧菌病的主要病原菌之一,給海水養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。哈維氏弧菌的胞外蛋白酶、磷酯酶、溶血素、Ⅲ型分泌系統(tǒng)、密度感應(yīng)系統(tǒng)等與其致病性密切相關(guān)。目前國內(nèi)對細(xì)菌病防治仍然主要靠化學(xué)藥物及抗生素,由此帶來的環(huán)境污染、藥物殘留及細(xì)菌耐藥性現(xiàn)象日

2、益明顯。疫苗防治方法由于安全無污染,是未來疾病防治的首選措施。
　　 微生物常遇到環(huán)境中較多的活性氧自由基的損害。硫氧還蛋白系統(tǒng)包括硫氧還蛋白、硫氧還蛋白還原酶和NADPH,是一個廣泛分布的NADPH依賴性二硫化物還原酶系統(tǒng),廣泛地存在于真核生物和原核生物中。硫氧還蛋白系統(tǒng)與體內(nèi)細(xì)胞氧化還原反應(yīng)、核酸代謝、細(xì)胞生長密切相關(guān)。其中,硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)

3、AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶。主要功能是催化NADPH將小分子蛋白硫氧還蛋白上的二硫鍵(-S-S)還原成(-SH)2的反應(yīng),維持Trx的還原型,可以維持細(xì)胞自由基產(chǎn)生和清除之間的平衡,在微生物適應(yīng)環(huán)境及細(xì)菌致病性方面發(fā)揮重要作用。
　　 本文從致病性哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)SF1基因組中擴(kuò)增獲得含硫氧還蛋白還原酶基因的1133 bp目的片段,連接至載體pMD19-T Simple,測序結(jié)果表明,目的片段含有960 b

4、p的硫氧還蛋白還原酶基因閱讀框,編碼319個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。BLAST分析顯示氨基酸序列與哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、副溶血弧菌、燦爛弧菌、弗氏弧菌的硫氧還蛋白還原酶蛋白序列相似性為分別為99％、98％、96％、94％、92％,該基因被命名為trxR。構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)／trxR后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3),用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE顯示重組蛋白分子量為34 kDa。用Ni瓊脂糖親和柱分離得