牛膝指紋圖譜和牛膝皂苷的提取及其藥理作用的研究.pdf

1、本研究通過光譜學以及蛋白分析作為指紋圖譜來鑒別懷牛膝、川牛膝的差異：在ABS提取優(yōu)化工藝的基礎上，首先測定了其溶血指數(shù)，然后探討了其對斑馬魚胚胎形態(tài)發(fā)育的影響，以及對淋巴細胞增殖、腹腔巨噬細胞吞噬功能及代謝的影響，來探討牛膝皂苷的毒性及藥理作用。最后通過腹腔注射研究了其對球蟲免疫雞免疫功能的影響。 為了分析懷牛膝與川牛膝兩個不同品種牛膝化學成分的差異，我們通過紫外，可見光譜法、紅外光譜法、X射線衍射法及蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳

2、法分別建立兩種牛膝的指紋圖譜。結(jié)果顯示：兩種牛膝的紫外光譜、紅外光譜與X射線衍射圖譜存在明顯差異，可有效區(qū)分兩者，而其蛋白質(zhì)指紋圖譜相似，不能有效區(qū)分兩者。 本文采用正交設計對懷牛膝總皂苷提取方法進行了研究，選擇乙醇濃度、溶劑量、提取時間以及次數(shù)作為影響ABS醇提取工藝的4個主要因素。每個因素3個水平進行試驗。結(jié)果表明，牛膝皂苷的最佳提取方法為80％乙醇回流2次，每次加醇8倍量，提取時間為3h。然后以齊墩果酸為對照品，采用香草醛

3、，高氯酸比色法測定牛膝總皂苷的含量為60％。 為了觀察牛膝皂苷的毒性及其藥理作用，我們通過溶血試驗測定牛膝皂苷的溶血指數(shù)，觀察牛膝皂苷對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響，采用MTT法研究牛膝皂苷對雞體外淋巴細胞增殖以及對大鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能及代謝影響等。結(jié)果顯示：牛膝皂苷有一定的溶血作用，溶血指數(shù)為5555，即HD50為180μg/ml；低濃度(1、2 mg/L)牛膝皂苷處理的斑馬魚胚胎，孵化率為100％，高濃度(20mg/ml)時抑

4、制斑馬魚胚胎的發(fā)育；低濃度(1.56-25μg/ml)牛膝皂苷對淋巴細胞增殖均無促進作用，但在1600μg/ml濃度下對T、B淋巴細胞的增殖具有抑制作用；低濃度(0.78-25μg/ml)ABS對大鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能及代謝無明顯影響，但在50-200μg/ml范圍內(nèi)表現(xiàn)出促進作用，500μg/ml濃度時對巨噬細胞的代謝有抑制作用。 為了觀察牛膝皂苷對肉雞球蟲免疫的影響，我們于18、25、32、39日齡時采血分離淋巴細胞，通

5、過MTT法測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平，流式細胞技術檢測外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群的動態(tài)變化，并檢測了不同時期試驗雞增重及脾指數(shù)的變化情況。結(jié)果顯示：ABS能夠提高球蟲免疫雞的淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平，升高CD4+/CD8+比值，各組增重、脾指數(shù)均無顯著差異，這提示注射用牛膝皂苷能夠促進球蟲免疫雞的免疫機能狀態(tài)。 以上結(jié)果表明，懷牛膝與川牛膝的紫外光譜、紅外光譜與X射線衍射圖譜存在明顯差異；醇提懷牛膝總皂苷的最佳工藝為8倍量80％乙