葡萄糖和胰島素對鵝肝細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝影響的研究.pdf

1、動物肝臟是維持糖代謝平衡的主要器官，葡萄糖代謝和脂肪酸代謝相關(guān)基因的表達(dá)在激素和營養(yǎng)的作用下發(fā)生改變可以調(diào)控肝臟的脂肪沉積。本實驗擴(kuò)增出鵝葡萄糖代謝和脂肪酸代謝的關(guān)鍵基因PEPCK、ME、PPARβ的序列，然后以30日齡左右四川白鵝原代肝細(xì)胞為材料，添加不同葡萄糖和胰島素處理鵝肝細(xì)胞，檢測肝細(xì)胞活性、細(xì)胞VLDL分泌、細(xì)胞內(nèi)外TG和ME活性的變化情況.并應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測DGAT1、DGAT2、FoxO1、MTP、ApoB、PE

2、PCK和CPT-1mRNA表達(dá)的變化情況，獲得以下主要結(jié)果：
　　 (1)首次擴(kuò)增得到了四川白鵝PEPCK、ME和PPARβ三個基因的部分CDS，它們的大小分別為636bp、297bp和766bp。
　　 (2)通過序列BLAST比對發(fā)現(xiàn)，鵝PEPCK、ME和PPARβ基因與原雞或斑胸草雀的同源性都在90％以上，通過構(gòu)建進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)鵝這幾個基因都與原雞或斑胸草雀聚為一類。
　　 (3)胰島素能增加鵝原肝細(xì)胞生長活性

3、，150nmol/L胰島素是鵝肝細(xì)胞生長最適濃度，胰島素濃度過高(200nmol/L)會引起肝細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗，抑制細(xì)胞活性。合理濃度的葡萄糖也能夠促進(jìn)鵝肝細(xì)胞生長，胰島素和葡萄糖的協(xié)同效應(yīng)作用時效果更加明顯。
　　 (4)胰島素和葡萄糖均能增加鵝肝細(xì)胞的TG含量，協(xié)同作用時，效果更加明顯。50nmol/L的胰島素少量促進(jìn)鵝肝細(xì)胞TG分泌，濃度增加胰島素對TG的分泌量的影響不顯著；葡萄糖促進(jìn)鵝肝細(xì)胞TG分泌。50nmol/L濃

4、度胰島素促進(jìn)鵝肝細(xì)胞VLDL分泌，濃度增加，分泌受到抑制；葡萄糖可以促進(jìn)VLDL的分泌。
　　 (5)ME的活性隨著葡萄糖濃度升高而增加；50nmol/L的胰島素顯著增加ME的活性，但隨著濃度升高其增加幅度逐漸降低，當(dāng)胰島素濃度達(dá)到200nmol/L時，ME的活性受到抑制；葡萄糖和胰島素的協(xié)同作用也促進(jìn)ME的活性，其中100nmol/L胰島素組的促進(jìn)作用低于50nmol/L胰島素組。
　　 (6)處理細(xì)胞24h后，50n

5、mol/L濃度胰島素誘導(dǎo)DGAT1、DGAT2、CPT-1表達(dá)；FoxO1的mRNA表達(dá)在50nmol/L和100nmol/L的胰島素影響下有明顯的提高，當(dāng)胰島素濃度達(dá)到150nmol/L時，F(xiàn)oxO1的表達(dá)有所下降；MTP的表達(dá)同樣被胰島素促進(jìn)，但是隨著濃度的升高，促進(jìn)作用減弱；ApoB、PEPCK表達(dá)受到胰島素的抑制，而且胰島素濃度越高，抑制效益越明顯。葡萄糖對MTP的mRNA表達(dá)是抑制的；葡萄糖促進(jìn)其他測定的葡萄糖代謝相關(guān)基因的表

6、達(dá)，糖濃度越高，促進(jìn)作用越明顯。在胰島素和葡萄糖協(xié)同作用中，50nmol/L胰島素處理下，無論低糖還是高糖，對葡萄糖代謝平衡相關(guān)基因的表達(dá)都有一定的誘導(dǎo)作用。而在l00nmol/L胰島素的處理下，相對與50nmol/L胰島素處理而言，其他基因表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，只有ApoB的表達(dá)有所抑制，而且高糖比低糖的抑制效應(yīng)更強(qiáng)。
　　 (7)在葡萄糖處理中，胞外VLDL濃度與DGAT1、MTP基因表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，胞內(nèi)TG與D