遼寧絨山羊卵母細(xì)胞體外成熟與體外受精的研究.pdf

1、為探索出一套適宜的遼寧絨山羊卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)，滿足科研和生產(chǎn)對(duì)早期胚胎的需要，本試驗(yàn)進(jìn)行了遼寧絨山羊卵泡卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)和受精的研究。
　　 1.實(shí)驗(yàn)比較了切割法和抽吸法從屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母細(xì)胞數(shù)及成熟率。結(jié)果表明切割法采集得到的可用卵母細(xì)胞數(shù)（2.52枚/卵巢）顯著高于抽吸法(1.80枚/卵巢)(P＜0.05)，但成熟率差異不顯著。在遼寧絨山羊卵母細(xì)胞收集中，切割法要優(yōu)于抽吸法。
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2、.實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了收集的卵中成熟卵所占的比率，根據(jù)卵丘細(xì)胞的完整性將收集到的卵分為三組，COCs、COCs1-3和NOs，成熟卵的比率分別為1.19％、2.56％和4.96％，說(shuō)明收集的卵中會(huì)有少量的成熟卵，而裸卵中成熟卵所占的比率最大。
　　 3.遼寧絨山羊卵母細(xì)胞IVM條件為:39℃、5％CO2飽和濕度，基礎(chǔ)培養(yǎng)液+10％FCS+10IU/m(l)FSH+20ug/mlLH+25IU/m(l)PMSG;培養(yǎng)22-24h，成熟率可達(dá)

3、78.44％，大卵泡卵母細(xì)胞成熟率達(dá)85.42％的，這與其他山羊相似。
　　 4.實(shí)驗(yàn)將卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)16h、18h、20h、24h、26h，成熟率分別為57.90％、70.02％、73.59％、75.40％、76.66％，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)成熟率逐步升高，培養(yǎng)16h的成熟率顯著低于18-26h(P＜0.05)，而培養(yǎng)24h和26h的受精率和卵裂率最高，說(shuō)明遼寧絨山羊卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)18h基本達(dá)到核成熟，而體外培養(yǎng)24-26h可達(dá)

4、胞質(zhì)成熟，能提高成熟率和受精率。
　　 5.實(shí)驗(yàn)用血清培養(yǎng)基和無(wú)血清基培養(yǎng)卵母細(xì)胞，血清培養(yǎng)基的成熟率(78.44％)略高于無(wú)血清培養(yǎng)基(74.10％)，但差異不顯著(P＞0.05)。說(shuō)明在遼寧絨山羊可用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)。
　　 6.遼寧絨山羊卵母細(xì)胞IVF時(shí)，懸浮法適合于細(xì)管凍精中高活力精子的獲取;IVF條件為:38.5℃、5％CO2飽和濕度，精子洗滌液和受精液采用mTyrode'液，獲能液采用m

5、Tyrode'液+20μg/ml肝素鈉，受精卵培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20％FCS;受精率和卵裂率可達(dá)60.63％和41.75％，這比綿羊的報(bào)道要低。
　　 7.實(shí)驗(yàn)比較了卵泡直徑對(duì)卵母細(xì)胞回收率和體外培養(yǎng)效果的影響，直徑≤2mm、2.1-5mm和5mm以上三類卵泡的回收率分別為56.01％、51.91％和50.57％，可用卵的比率分別為85.42％、72.75％和58.39％，成熟率分別為96.00％、73.42％和54.91％。

6、結(jié)果表明:卵母細(xì)胞的回收率和可用卵的比率及成熟率均與卵泡直徑呈正相關(guān);直徑2.1-5mm卵泡的卵母細(xì)胞受精率和卵裂率分別為59.15％和42.50％，顯著高于直徑＞5mm卵泡和≤2mm卵泡(P＜0.05)，適合體外胚胎的生產(chǎn);直徑≤2mm卵泡的卵母細(xì)胞因未發(fā)育充分體外發(fā)育潛能最差;直徑＞5mm卵泡的卵母細(xì)胞可能因體外培養(yǎng)成熟過(guò)度而老化導(dǎo)致受精率和卵裂率降低。
　　 8.實(shí)驗(yàn)測(cè)定了卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟和受精的影響，第一步，將

7、一部分COCs經(jīng)機(jī)械吹打脫除卵丘細(xì)胞成為DOs，然后以DOs、DOs(COCs)、DOs(CCs)、COCs四種方式培養(yǎng)，第二步將所獲COCs、COCs1-3、NOs各自單獨(dú)培養(yǎng)。結(jié)果表明，COCs組的成熟率、受精率和卵裂率分別為82.85％、60.63％和41.75％，極顯著高于其它三組(P＜0.01)，卵丘細(xì)胞的存在有利于卵母細(xì)胞體外成熟和隨后的發(fā)育，COCs組成熟率、受精率和卵裂率分別為83.25％、59.43％和42.50％，顯