外源抗原在蠟樣芽胞桿菌細(xì)胞表面展示的可行性研究.pdf

1、本研究室劉梅利用蘇云金芽胞桿菌的S-層蛋白在蘇云金芽胞桿菌細(xì)胞表面成功展示了禽流感病毒核衣殼蛋白（NP）、血凝素蛋白（HA1）和雞毒霉形體粘附素蛋白（pMGA）等禽類(lèi)病原體抗原，雖然實(shí)驗(yàn)證實(shí)蘇云金芽胞桿菌BMB171對(duì)小鼠和雞都安全無(wú)毒，但其是否具有益生作用，還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道；蠟樣芽胞桿菌在畜牧業(yè)中常被用作微生態(tài)制劑來(lái)使用，本文在劉梅等研究的基礎(chǔ)上利用細(xì)菌細(xì)胞表面展示技術(shù)，探索在蠟樣芽胞桿菌細(xì)胞表面展示外源抗原的可行性，為研制能耐高溫同時(shí)

2、具有益生作用的禽用口服疫苗提供理論基礎(chǔ)。
　　 1．蠟樣芽胞桿菌重組菌株的構(gòu)建
　　 以蘇云金芽胞桿菌CH和BCCH菌株為出發(fā)菌株，進(jìn)行質(zhì)粒pCSHA1P、pCTC-HA1P和pMIL-CSA的抽提和酶切鑒定，將鑒定正確的重組質(zhì)粒分別電轉(zhuǎn)化至蠟樣芽胞桿菌中，其中包含質(zhì)粒pCSHA1P的重組菌株命名為BcA，同時(shí)含有兩個(gè)質(zhì)粒pCTC-HA1P和pMIL-CSA的重組菌株命名為BcC。其中質(zhì)粒pMIL-CSA攜帶有csaAB

3、操縱元，在轉(zhuǎn)化不含csaAB操縱元的重組質(zhì)粒時(shí)要同時(shí)轉(zhuǎn)化該質(zhì)粒，以便給受體菌株提供csaAB操縱元。
　　 2．檢測(cè)外源抗原蛋白在重組菌株細(xì)胞表面的展示情況
　　 用血凝和血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)BcA和BcC這兩個(gè)重組菌株的表面展示情況。結(jié)果，這兩個(gè)重組菌株均表現(xiàn)出了預(yù)計(jì)的生物學(xué)活性，說(shuō)明所構(gòu)建的S-層融合蛋白基因在受體菌株中得到表達(dá)并展示到了細(xì)胞表面且具有活性。
　　 3．檢測(cè)重組菌株對(duì)雛雞的免疫原性