微囊藻毒素-LR對(duì)斑馬魚(yú)生殖和生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其機(jī)制.pdf

1、湖泊富營(yíng)養(yǎng)化和藍(lán)藻水華頻繁爆發(fā)是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外迫切關(guān)注的環(huán)境問(wèn)題，其主要危害之一是微囊藻毒素(Microcystins，MCs)的產(chǎn)生。大量研究表明，MCs不但是典型的肝毒素，還具有明顯的生殖毒性，可對(duì)魚(yú)類的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響。為了系統(tǒng)地評(píng)估MCs對(duì)魚(yú)類生殖和生長(zhǎng)發(fā)育的毒性效應(yīng)，本研究選取模式生物斑馬魚(yú)（Danio rerio）作為實(shí)驗(yàn)材料，首先在急性毒性實(shí)驗(yàn)中研究了腹腔注射MC-LR后斑馬魚(yú)卵巢的病理?yè)p傷及抗氧化系統(tǒng)響應(yīng)的時(shí)間劑量效應(yīng)規(guī)

2、律;進(jìn)一步采用生命周期暴露，從生長(zhǎng)參數(shù)、超微組織病理學(xué)損傷、性激素含量及調(diào)控通路上關(guān)鍵基因表達(dá)水平幾方面，系統(tǒng)分析了環(huán)境相關(guān)劑量下MC-LR對(duì)斑馬魚(yú)生長(zhǎng)、生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的干擾效應(yīng);最后，通過(guò)亞慢性暴露實(shí)驗(yàn)，從精巢組織學(xué)、性激素含量、相關(guān)基因和蛋白表達(dá)多個(gè)層面，全面地評(píng)估了MC-LR對(duì)成年雄性斑馬魚(yú)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的毒性影響和干擾作用，并對(duì)其雌激素效應(yīng)潛力及產(chǎn)生機(jī)制進(jìn)行了合理的推斷。本研究的開(kāi)展為全面系統(tǒng)地認(rèn)識(shí)MC-LR的生長(zhǎng)和生殖毒性、內(nèi)

3、分泌干擾效應(yīng)及評(píng)估自然條件下MC-LR雌激素效應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　1.在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，以雌性斑馬魚(yú)為研究對(duì)象，腹腔注射50和200μg/kg BW劑量的MC-LR，分別在注射后1、3、12、24、48、168 h后取樣，研究結(jié)果顯示:卵巢病理變化在注射后12h內(nèi)呈時(shí)間依賴性增長(zhǎng)，主要表現(xiàn)為空泡化、細(xì)胞間隙擴(kuò)大和細(xì)胞溶解;同時(shí)MDA含量顯著升高，伴隨著抗氧化酶CAT、SOD、GPx活性及基因表達(dá)不同程度

4、的增加，表明氧化脅迫在MC-LR引起的生殖毒性中起著重要作用;卵巢中GSH的大量消耗暗示GSH解毒途徑可能在MC-LR解毒中發(fā)揮著關(guān)鍵作用;168 h后卵巢病理?yè)p傷和抗氧化機(jī)能的恢復(fù)，表明組織中抗氧化防御系統(tǒng)的響應(yīng)是緩解MC-LR毒性影響的重要機(jī)制之一。
　　2.在生命周期實(shí)驗(yàn)中，斑馬魚(yú)從幼魚(yú)階段(5 d)開(kāi)始暴露于0、0.3、3和30μg/LMC-LR90 d至性成熟。結(jié)果表明:環(huán)境劑量（大于3μg/L）的MC-LR可導(dǎo)致生長(zhǎng)受

5、阻，腦、肝臟病理學(xué)損傷，性腺發(fā)育遲緩;MC-LR對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的抑制效應(yīng)可能是通過(guò)下調(diào)GH/IGF軸上游ghrh、pacap1、gh，以及性腺中g(shù)hra、igf3、igf2r（雌魚(yú)和雄魚(yú)）和igf1（僅雄魚(yú)）基因表達(dá)造成的，并表現(xiàn)出一定的雌雄差異性;3和30μg/L濃度下，卵巢T含量顯著下降，而E2含量仍保持穩(wěn)定，結(jié)合HPGL軸基因表達(dá)結(jié)果推測(cè)，性激素變化可能由于卵巢發(fā)育遲緩引發(fā)機(jī)體負(fù)反饋調(diào)節(jié)，導(dǎo)致腦中上游基因fshβ和lhβ上調(diào)發(fā)揮補(bǔ)償效

6、應(yīng)，促進(jìn)下游性腺中T向E2的轉(zhuǎn)化增加。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示，各處理組雌魚(yú)肝臟vtg1基因表達(dá)和卵巢中VTG含量均顯著降低，表明MC-LR會(huì)減少雌性斑馬魚(yú)卵巢的卵黃儲(chǔ)積，進(jìn)而影響卵母細(xì)胞的成熟及生殖功能。
　　3.在亞慢性實(shí)驗(yàn)中，將成年雄性斑馬魚(yú)暴露于0、0.3、1、3、10、30μg/L MC-LR30d。研究發(fā)現(xiàn):MC-LR暴露可引起斑馬魚(yú)GSI減小、精巢細(xì)胞間隙擴(kuò)大、成熟精子比例降低;MC-LR還能干擾HPGL軸相關(guān)基因表達(dá)，造

7、成腦中上游基因（gnrh2、gnrh3、cyp19b、erα、erβ、ar、fshβ和lhβ）普遍出現(xiàn)劑量依賴性下調(diào);精巢中類固醇激素合成基因（star、cyp11a、cyp17、cyp19a和fshr）在3μg/L出現(xiàn)上調(diào)，但隨著濃度的繼續(xù)升高而有所回落;精巢中性激素E2和T同樣出現(xiàn)非劑量依賴性升高，在10μg/L濃度下達(dá)到高峰，該結(jié)果暗示MC-LR內(nèi)分泌干擾效應(yīng)可能是其雌激素效應(yīng)和細(xì)胞毒性雙重特性的體現(xiàn)。此外，3、10和30μg/L