獲能與冷凍處理對豬精子蛋白酪氨酸磷酸化水平的影響.pdf

1、本次研究的主要目的是檢測獲能和冷凍處理對豬精子蛋白酪氨酸磷酸化水平的影響。以手握法采集的豬精液為試驗(yàn)材料，試驗(yàn)主要分4步進(jìn)行：Ⅰ檢測肝素濃度(0、10、50、100μg/mL)和獲能處理時間(0、30、60、90、120min)對豬精子獲能效率的影響；Ⅱ檢測肝素濃度對精子體外存活時間及精子質(zhì)量參數(shù)的影響；Ⅲ將獲能處理不同時間的精子進(jìn)行間接免疫熒光法處理，熒光顯微鏡下顯示精子蛋白酪氨酸磷酸化水平變化；Ⅳ將精子進(jìn)行冷凍處理，分別處理不同時間

2、，解凍后進(jìn)行間接免疫熒光處理，熒光顯微鏡下顯示精子酪氨酸磷酸化蛋白水平。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、未添加肝素組（對照組）也有一定的獲能率，但是低于其他肝素處理組（試驗(yàn)組）。獲能率隨著獲能時間和肝素濃度的增加而逐漸升高。濃度為50μg/mL和100μg/mL的肝素處理60min后出現(xiàn)平臺期，顯著高于其他組（P<0.05）。
　　2、肝素濃度的增加引起精子體外存活時間的減少。100μg/mL濃度試驗(yàn)組精子存活時間明顯下降，與其他試

3、驗(yàn)組差異顯著（P<0.05）。隨著獲能時間的增加，精子活率逐漸降低。獲能處理對精子質(zhì)膜完整性的影響很大，所有試驗(yàn)組均與對照組差異顯著（P<0.05）。
　　3、獲能處理對豬精子蛋白酪氨酸磷酸化水平變化影響明顯；未經(jīng)處理的精子僅在精子頸部可見略淡的酪氨酸磷酸化位點(diǎn)。而經(jīng)過處理的精子蛋白酪氨酸磷酸化程度加深，熒光顯色明顯，在精子頂體部和尾部均可見明顯的酪氨酸磷酸化位點(diǎn)。隨著獲能處理時間的延長，精子頂體部與尾部熒光顯色越來越明顯，證明獲