免疫血液學(xué)一

1、,第四章 免疫血液學(xué),醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系 張晨光 3832185,主要內(nèi)容： 1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng) 2、HLA血型 3、血小板血型系統(tǒng) 4、血清型 5、輸血前免疫血液檢查 6、新生兒溶血病,,免疫血液學(xué),ABO血型的問(wèn)題,問(wèn)題的發(fā)現(xiàn)——正反定型不符可能性有許多種ABO亞型，疾病因素，年齡體質(zhì)和個(gè)體差異，冷抗體，自身抗體，輸血，其它血型抗體的干擾，蛋白干擾，多凝集等

2、。通常情況下O型紅細(xì)胞加AB血漿可以解決問(wèn)題，但不總是這樣。孟買型和類孟買型常常不能輸O型血,?,Rh血型問(wèn)題,Rh陰性的患者輸什么樣的血？輸什么樣的血成分？RhD亞型問(wèn)題（弱D，不完全D，Del）Rh系統(tǒng)抗D、C、c、E、e抗體及其聯(lián)合Rh血型錯(cuò)誤輸血的后果,同種抗體問(wèn)題,常見(jiàn)紅細(xì)胞同種抗體有那些？如何鎖定目標(biāo)？譜細(xì)胞，抗原/抗體測(cè)定，效價(jià)測(cè)定它們的臨床意義是否為溫抗體？是否致敏補(bǔ)體？紅細(xì)胞上有多少抗原？以往表現(xiàn)如何

3、？是否能提供配合型的血？是否有權(quán)宜方案？（親屬血）,自身抗體問(wèn)題,自身抗體冷自身抗體和溫自身抗體如何鎖定目標(biāo)？針對(duì)紅細(xì)胞的直抗試驗(yàn)和放散試驗(yàn)，針對(duì)血清的間抗試驗(yàn)病史，輸血史它們的臨床意義是否為溫抗體？藥物抗體，類抗體，多凝集是否能提供配合型的血？是否有權(quán)宜方案？,新生兒溶血病診斷及換血,新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)室診斷 直抗試驗(yàn)、游離試驗(yàn)、釋放試驗(yàn) ABO溶血病 換血血液的選擇Rh溶血病 換血血液的選擇,

4、骨髓移植后輸血,紅細(xì)胞血型的選擇血小板血型的選擇,其它特定病患的輸血前檢查,白血病消化道疾病多發(fā)性骨髓瘤冷凝集素病大量輸血輸液患者,已經(jīng)發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的患者,區(qū)分自身抗體和同種抗體分離自身和輸入的紅細(xì)胞正確鑒定血型正確鑒定抗體血漿置換交換輸血,1818年英國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)生布倫德?tīng)柍晒Φ赜幂斞然盍艘幻a(chǎn)后大出血的產(chǎn)婦，成為人類歷史上成功輸血的第一例。,1900年奧地利維也納大學(xué) LandsteinerLands

5、teiner（1868－1943）獲得1930年諾貝爾獎(jiǎng)金發(fā)現(xiàn)了ABO、MN、P、RH等許多血型,ABO血型的發(fā)現(xiàn),ABO血型發(fā)現(xiàn)的意義,打開(kāi)了免疫血液學(xué)、免疫遺傳學(xué)的大門為臨床輸血鋪平了道路，使它成為一項(xiàng)有效的治療手段。,1900年→ → →2009年,1990年,1985年,,,ABO血型系統(tǒng)從血清學(xué)到分子生物學(xué),抗原決定簇 (表位),血型抗原是紅細(xì)胞上的一種特異性的呈立體排列的化學(xué)基團(tuán)。依生化性質(zhì)人紅細(xì)胞抗原決定簇可分

6、為多肽和糖分子兩類。,人出生時(shí)，抗原決定簇是多肽的紅細(xì)胞膜的血型抗原已發(fā)育成熟，而決定簇為糖分子的血型抗原則在出生后逐漸發(fā)育成熟。,,決定簇,糖分子,多肽,,,,ABH，LweisIi，T／Tn,抗原,MNSs，Rh，Kell，Kidd,存在多種細(xì)胞表面體液和分泌液中,只分布于紅細(xì)胞膜其他血細(xì)胞膜上,分布,組織血型抗原可以表示細(xì)胞分化和成熟的標(biāo)志，胎兒和新生兒紅細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)i抗原，弱I抗原，而成人則為強(qiáng)I抗原，弱i抗原。,IgG,

7、相對(duì)分子量為15萬(wàn)，由2條重鏈及2條輕鏈構(gòu)成，根據(jù)重鏈恒定區(qū)氨基酸序列的差異，分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4四種亞類。IgG是唯一能通過(guò)胎盤到達(dá)胎兒的免疫球蛋白(1gG2通過(guò)胎盤效率最低)，并有結(jié)合補(bǔ)體的能力，IgG3結(jié)合補(bǔ)體能力最強(qiáng)。其次是IgGl，所以IgG3和IgGl在溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病中有重要意義。,IgM,相對(duì)分子量為90萬(wàn)，由5個(gè)免疫球蛋白單體通過(guò)J鏈連接而組成的五聚結(jié)構(gòu)。IgM是胎兒免疫系統(tǒng)成熟時(shí)

8、最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，并具有高度的有效凝集素，使補(bǔ)體活化的效率高，1個(gè)IgM分子與紅細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，就能引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解現(xiàn)象。,ABO血型系統(tǒng)抗體若按產(chǎn)生的原因又分為“天然抗體”和“免疫性抗體”?！疤烊豢贵w”主要由自然界中與A、B抗原類似的物質(zhì)(細(xì)菌)免疫刺激產(chǎn)生，以IgM為主。 “免疫性抗體”主要是由母嬰血型不合的妊娠、血型不合及有輸血史的輸血產(chǎn)生，以IgG為主。,ABO抗體的特性,“天然抗體”與“免疫性抗體”的特征及區(qū)

9、別,,,,特性,天然抗體（IgM）,免疫性抗體（IgG）,抗原刺激,分子量,與紅細(xì)胞反應(yīng)的最適溫度,被血型物質(zhì)中和,溶血素效價(jià),耐熱性,在鹽水中與相應(yīng)紅細(xì)胞,反應(yīng)發(fā)生肉眼可見(jiàn)凝集,對(duì)酶處理紅細(xì)胞的反應(yīng),通過(guò)胎盤,無(wú)察覺(jué),100萬(wàn),4--25℃,能,較低,不耐熱（冷抗體）,能,變化不大,不能,有（妊娠、輸血）,15萬(wàn),37℃,不能,較高,耐熱（溫抗體）,不能,能反應(yīng),能,人在出生前尚未產(chǎn)生抗體.ABO抗體出生后3-6個(gè)月出現(xiàn)，5-6歲時(shí)

10、達(dá)高峰; 成人隨年齡增長(zhǎng)而降低。新生兒血清中抗體常是來(lái)自母體的IgG，偶爾也有胎兒自身產(chǎn)生的IgM。由于新生兒血型抗原位點(diǎn)少，抗體效價(jià)低，為此檢測(cè)血型時(shí)應(yīng)十分慎重，可因抗原少或抗體效價(jià)低而凝集不明顯而誤定血型?？笰、抗B、抗AB抗體存在于所有缺少相應(yīng)抗原的人血清中，唾液、乳汁、淚液等各種體液及分泌物中也可發(fā)現(xiàn)ABO抗體.,ABO抗體的產(chǎn)生及存在部位,2 9個(gè)血型系統(tǒng)， 2 0 0多個(gè)抗原,第一節(jié)

11、紅細(xì)胞血型系統(tǒng),一、ABO血型系統(tǒng),ABH血型抗原不僅存在于紅細(xì)胞表面，而且還廣泛存在于消化道，皮膚上皮細(xì)胞，呼吸道及泌尿系統(tǒng)，包括唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、乳液、羊水、體腔液及卵巢囊腫液中。,ABO血型系統(tǒng)的獨(dú)特特點(diǎn),A和B抗原的免疫原性強(qiáng)血清中規(guī)律性存在抗A和/或抗B抗體分泌型個(gè)體的血漿、唾液、組織細(xì)胞等處存在A、B、H血型物質(zhì),ABO血型系統(tǒng)是根據(jù)每個(gè)人紅細(xì)胞上是否存在A和B抗原，可將人分成四種血型,ABO血型的配合性是

12、輸血前試驗(yàn)的重要基礎(chǔ),血型抗原能夠激活免疫系統(tǒng) ：,母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血,ABO血型的主要抗原和抗體,已知血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血清+已知紅細(xì)胞 （正定型） （反定型） 抗A 抗B 受檢者血型 A細(xì)胞 B細(xì)胞 O

13、細(xì)胞 ＋ － A － ＋ － － ＋ B ＋ － － － － O ＋ ＋ － ＋ ＋ AB － － －,,,,(一) ABO血型的遺傳

14、基礎(chǔ),我們從雙親的染色體各獲得一半的遺傳基因。我們遺傳的是二個(gè)血型基因，一個(gè)是從母親那兒來(lái)的A、B或O基因。另一個(gè)基因來(lái)自父親的A、B或O基因。,基因型，從雙親染色體上所遺傳下來(lái)的基因。表型，所觀察到的遺傳基因即血型本身。A和B基因?qū)τ贠基因是顯性基因，O基因是隱性基因。,不同婚配類型子女可能的血型,(二) ABO血型表型的頻率,中國(guó)：從北向西南的方向，B基因頻率逐漸下降，而O基因頻率升高；云貴川和長(zhǎng)江中下游地區(qū)A基因頻率升

15、高，兩廣、福建、臺(tái)灣O基因頻率較其它地區(qū)高。歐洲：A基因頻率最高B基因在亞洲頻率最高。,(三),(三) ABO血型抗原的生化合成,ABO系統(tǒng)抗原概述,A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類決定簇。二者之間的區(qū)別在于免疫結(jié)構(gòu)域末端單糖性質(zhì)不同。A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基是D-半乳糖。,Type1 Galβ1－3GlcNAc β1－R （主要存在于血漿）

16、Type2 Galβ1－4GlcNAc β1－R （存在于紅細(xì)胞、血漿）,ABO生化合成的概述----血型前體物質(zhì),在H基因編碼產(chǎn)生的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(H轉(zhuǎn)移酶)的作用下，把一個(gè)巖藻糖接在其前身物質(zhì)即紅細(xì)胞膜上寡糖鏈的半乳糖上形成H物質(zhì)(H抗原)，它是A、B抗原的前身物質(zhì)。,ABO生化合成的概述----H物質(zhì),ABO生化合成的概述----A酶和B酶,A抗原,D-半乳糖(H物質(zhì)) + N-乙酰半乳

17、糖胺,D-半乳糖(H物質(zhì)) +D-半乳糖,B抗原,A和B抗原是紅細(xì)胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類決定簇。A抗原 N-乙酰半乳糖胺(GaLNAc)B抗原 D-半乳糖(GaL)。,ABO生化合成的概述----A抗原和B抗原,H抗原是形成A、B抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，但是H物質(zhì)抗原性很弱，血清中一般沒(méi)有抗H抗體。O型就只有H抗原，O基因?yàn)闊o(wú)效基因，不會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，糖不會(huì)連接到H物質(zhì)上。如果缺失H基因，即缺乏H轉(zhuǎn)移酶，則

18、無(wú)H物質(zhì)，這時(shí)即使體內(nèi)存在A或B轉(zhuǎn)移酶也不能形成A或B抗原，如hh型(孟買型)就是缺乏H基因。,ABO生化合成的概述----0型和孟買型,ABO系統(tǒng)概述,O基因的產(chǎn)物是一種無(wú)活性的轉(zhuǎn)移酶，不能轉(zhuǎn)移任何糖基到H抗原上，因此O型個(gè)體的抗原就是H抗原。,ABO抗原不是ABO基因的直接產(chǎn)物，A和B基 因編碼不同的糖基轉(zhuǎn)移酶，催化不同的糖基轉(zhuǎn)移到H抗原末端半乳糖基上，形成相應(yīng)的A或B抗原。,ABO基因糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（1）,ABO基因糖基

19、轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)模式圖（2）,ABO物質(zhì)的生物合成,A、B、H血型物質(zhì),1930年Lehrs發(fā)現(xiàn)唾液中有A和B物質(zhì)1943年Wiener發(fā)現(xiàn)分泌型占80％AB物質(zhì)的量具有較顯著的個(gè)體差異血清中的血型物質(zhì)較弱唾液中的血型物質(zhì)較容易測(cè)到,---常見(jiàn)ABO亞型,A抗原中主要為A1和A2 其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、 Amos 、Aint、 Aw和AelB亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm、 Bmos和Bel等

20、其他亞型：嵌合體(Chimera) 、 CisAB型、孟買型、類孟買型,(四)ABO血型系統(tǒng)的抗原，亞型及變異型,ABO亞型的判斷,1. 紅細(xì)胞與抗A、抗A1、抗B及抗AB的凝集程度,2. 紅細(xì)胞上H物質(zhì)活性的強(qiáng)弱,3. 血清中是否存在抗A1,4.分泌型人的唾液中A、B和H物質(zhì),A1和A2決定簇的區(qū)別是僅存在量的差異還是抗原決定簇結(jié)構(gòu)不同？,A1型和A1B型紅細(xì)胞上的A1抗原數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于A2型和A2B型紅細(xì)胞，A1型個(gè)體血清中A酶的

21、活力也遠(yuǎn)強(qiáng)于A2型。表明二者之間有量的差別。A2和A2B個(gè)體常常產(chǎn)生抗A1，說(shuō)明A2細(xì)胞上缺乏A1細(xì)胞上的一種決定簇。,,H抗原強(qiáng)弱趨勢(shì)：O>A2 > B > A2B > A1 > A1B,A1和A2同樣存在質(zhì)的區(qū)別,兩種A型抗原:A、A1。 A1細(xì)胞具有A、A1抗原。 A2細(xì)胞只有A抗原。 B型人血清中有抗A和抗A1。 A1細(xì)胞與抗A、抗A1反應(yīng) A

22、2細(xì)胞只與抗A反應(yīng),,,,,血型,抗原,抗體,A1A2OB,A1、AAHB,抗B抗B、抗A1抗A、抗B、抗A1抗A、抗A1,A1基因與A2基因共同遺傳——A1A2基因被存在的A1基因所隱蔽A2基因與B或O基因配對(duì)時(shí)——A2B、A2此時(shí)的A2基因?yàn)轱@性遺傳,A1和A2的遺傳及表型,,根據(jù)ABO血型的血清學(xué)特點(diǎn)，A型和AB型可分為Al、A2和AlB、A2B四種亞型?？笰血清中含有抗A和抗A1兩種抗體，抗A可以凝集所

23、有A型和AB型紅細(xì)胞，而抗A1只能與一部分A型和AB型紅細(xì)胞反應(yīng). 據(jù)此凡與抗A1反應(yīng)者被定為A1或A1B型，不與抗A1反應(yīng)，而與抗A反應(yīng)者被定為A2或A2B型。,A1和A2亞型鑒定原理,A1和A2表型鑒別,血型 抗原 抗-A 抗-A1A1 A、A1 + +A2 A +

24、 -,,,,A1、A2的血清學(xué)區(qū)別是以抗Al試劑作試驗(yàn)獲得的?？笰1試劑：B型人的血清制成或?yàn)殡p花 扁豆提取并稀釋的植物凝集素。凡與抗A1試劑發(fā)生凝集反應(yīng)者為A1，如果同時(shí)還與抗B凝集，則為A1B型。不與抗A1試劑凝集者為A2或A2B型。,A1、A2亞型的鑒定方法,,防止誤定血型。在常規(guī)輸血試驗(yàn)中，A2或A2B型人的血清含有抗A1抗體，患者與供血者間的A1或A2需加以區(qū)別。 較A2更弱的亞血型不常發(fā)現(xiàn)， 一位弱亞型患者錯(cuò)

25、誤地定型為O型而輸予0型血液時(shí)，預(yù)期應(yīng)無(wú)嚴(yán)重的后果。 若一位具有弱A抗原的供血者血液，被定型錯(cuò)誤而輸給一位0型的患者時(shí)，則能引發(fā)嚴(yán)重的輸血反應(yīng)問(wèn)題。,A1、A2亞型的臨床意義,用A2細(xì)胞重復(fù)吸收來(lái)源于B型血清，可以移去所有抗A血清，血清中余下的抗體只能與A1型紅細(xì)胞反應(yīng)，表明B型個(gè)體的血清中含有抗A和抗A1兩種抗體。抗A1不僅存在于A2亞型，在B型和O型人的血清中除含抗A外還有抗A1 ，所以抗A1試劑可以從B型人血清中獲取。,,A

26、1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A HA2 4+ 0 4+ 3+ 0 2+ 0 4+ 0 A HA3 2+mf 0 2+mf 3+ 0

27、 + 0 4+ 0 A HAm 0/± 0 +/± 4+ 0 0 0 4+ 0 A HAx 0/± 0 +/2+ 4+ 0 2+ 0/2+ 4+ 0

28、 HB 0 4+ 4+ 0 3+ 4+ 0 0 B HB3 0 +mf 2+mf 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBm 0 0 0/±

29、 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBx 0 0/± 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 H,,A亞型及B亞型的鑒定表,紅細(xì)胞表現(xiàn)型,紅細(xì)胞與已知抗血清反應(yīng),血清與試劑紅細(xì)胞反應(yīng),分泌者唾液 含型物質(zhì),抗A 抗B

30、抗AB 抗H 抗A1 A1 A2 B O,,,注：mf為混合外觀凝集；0為無(wú)凝聚,,,,,,,,A3,最早由Friedenreich在1936年描述與抗A和抗AB共同孵育時(shí)：“混合視野外觀” 。即：小的凝集塊周圍是大量未凝集的細(xì)胞。與抗A反應(yīng)強(qiáng)度低于A2。與抗AB反應(yīng)呈混合視野,但并不增強(qiáng).偶有抗A1 (occasionally) 血型物質(zhì) A、 HA3不像是A2和O細(xì)胞的嵌合體,Aend（Afin

31、n，Abantu）,Aend最早由Weiner等于1959年描述類似于A3細(xì)胞：它們與一些抗A和抗AB表現(xiàn)很弱的混合視野外觀Aend分泌型的唾液中只有H物質(zhì)，但是無(wú)A物質(zhì)抗A1出現(xiàn)在部分Aend個(gè)體的血清中10％細(xì)胞凝集（Mf）,Am,Am細(xì)胞不能被抗A和抗AB凝集，或者僅能發(fā)生很弱的凝集。血型物質(zhì): A、 HAm細(xì)胞可以吸附放散抗A。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物質(zhì)，Am血清中通常無(wú)抗A1。Am作為ABO位點(diǎn)

32、上一個(gè)稀有等位基因遺傳。,Ax,Ax表現(xiàn)型最初于1935年報(bào)道，它的主要血清學(xué)特點(diǎn)是：紅細(xì)胞與多數(shù)來(lái)源于B型血清的抗A不發(fā)生反應(yīng)，但是可以被大多數(shù)來(lái)源于O型個(gè)體的抗AB凝集。血清中含有抗A1，有時(shí)可凝集A1和A2細(xì)胞除了H物質(zhì)，Ax分泌型個(gè)體唾液中可以撿出痕量的A物質(zhì)。,Ael,在通常的條件下，Ael細(xì)胞與抗A和抗AB不發(fā)生凝集，雖然它們可以結(jié)合這些抗體，結(jié)合的抗體通過(guò)吸收放散技術(shù)可以檢測(cè)到。Ael分泌型唾液中無(wú)A物質(zhì)，僅有H物

33、質(zhì)，血清中常含有抗A1，也可以含有能夠凝集A2細(xì)胞的抗體。Ael以ABO位點(diǎn)上的一種稀有的等位基因遺傳的。,各種弱A亞型的鑒別程序,B亞型,弱的B變異型是很少的?？赡苁怯捎谠谠S多群體中B基因的頻率要相對(duì)低得多。弱B亞型較難以分類。Salmon做出結(jié)論：B亞型最好的分類應(yīng)參照A變異型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類型的Bw。,成人與新生兒抗原數(shù)量比較,ABH 抗原決定簇,新生兒正定型：RBC與血型試劑反應(yīng)弱

34、。 1、5－6周的胚胎RBC就可檢測(cè)出來(lái) 2、出生時(shí)發(fā)育不完整 3、2－4歲紅細(xì)胞發(fā)育完全,新生兒通常不做反定型 1、 新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟 2、 血清抗體易受到母親血清的干擾,抗A、抗B的特性,IgM、IgGIgM抗體可被2－Me（2－巰基乙醇），DTT(2－硫蘇糖醇)破壞IgA抗體經(jīng)2－Me處理血清學(xué)活性下降，但抗體不破壞。IgG抗體分子量小，可以通過(guò)胎盤屏障,交叉反應(yīng)性抗AB：,來(lái)源于O型人血清

35、聯(lián)合抗體 ：抗（A＋B) 不是簡(jiǎn)單的混合A細(xì)胞與O型血清吸收后放散液可以凝集B細(xì)胞，反之亦然。,孟買型與類孟買型,孟買型（Oh）和類孟買血型(Amh /Bmh /ABmh /Omh ) 是人群中兩種非常罕見(jiàn)的稀有血型,紅細(xì)胞膜上缺乏A、B、H抗原，而血清中則含有抗A、抗B和抗H抗體。由于缺乏H基因，即使孟買型的人有ABO基因，也不會(huì)形成ABO抗原。孟買型個(gè)體血清中的抗H在4-37℃范圍內(nèi)都具有很強(qiáng)的活性。血清與所有O型人

36、的紅細(xì)胞反應(yīng)都很強(qiáng)。而且孟買型的抗H常含有IgG類抗體。,孟買型,細(xì)胞上沒(méi)有H抗原。其細(xì)胞上有少量的A或B抗原。原因:（1) H基因受到了其抑制基因z的影響，基因的表達(dá)產(chǎn)物大大下降，但仍有一小部分H抗原產(chǎn)生。(2)這一小部分H抗原在正常的A基因或B基因的作用下轉(zhuǎn)化成少量的A或B抗原。,類孟買型,ABO血型系統(tǒng)基因分型,ABO基因分型及核苷酸序列分析,聚合酶鏈反應(yīng)PCR-RFLPDNA序列測(cè)定,展 望,紅細(xì)胞血型領(lǐng)域中還