培養(yǎng)基的認(rèn)識(shí)及選擇

1、培養(yǎng)基的認(rèn)識(shí)及選擇,培養(yǎng)基的成分,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、無機(jī)鹽、雞蛋、動(dòng)物血清、生長(zhǎng)因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。,氮源,氮源和碳源,無糖,碳源和能源,氯化鈉：維持酶的活性、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外滲透壓磷酸鹽：緩沖作用,培養(yǎng)基的成分,凝固物質(zhì)：最常用的為瓊脂(agar)，它是從石花菜中提出來的一種半乳糖膠，100℃溶解，40℃凝固，可利用瓊脂來改變培養(yǎng)基的物理性狀(固體或半固體)，它是理想的固體培養(yǎng)基的賦形劑

2、，其本身不被細(xì)菌分解利用，也無營(yíng)養(yǎng)作用。,培養(yǎng)基的成分,抑菌劑和指示劑： 不是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的必需物質(zhì)，是制備細(xì)菌的選擇、鑒別培養(yǎng)基和判斷結(jié)果的需要。 常用的指示劑有：酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中國(guó)蘭等酸堿指示劑，美蘭為常用的氧化還原指示劑。 常用的抑菌劑有：膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。,培養(yǎng)基的分類,液體培養(yǎng)基：牛肉湯(牛肉浸液+1%蛋

3、白胨 +0.5%NaCl pH7.4) 半固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基+0.2~0.5% agar 固體培養(yǎng)基：液體營(yíng)養(yǎng)物+ 2% agar,按物理性狀,,培養(yǎng)基的分類,基礎(chǔ)培養(yǎng)基：是其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，如普通肉 湯、 普通瓊脂平板、斜面、高層營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：BAP、羅—琴培養(yǎng)基、呂氏血清斜

4、面選擇培養(yǎng)基：SS平板、BS平板、Mac平板等鑒別培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基、高滲培養(yǎng)基等,按用途,,常用的培養(yǎng)基,血瓊脂平板巧克力平板淋球菌平板念珠菌顯色平板MAC平板SS平板EMB平板TCBS平板M-H平板M-H血平板轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基,,血瓊脂平板,適用于各類細(xì)菌生長(zhǎng)觀察細(xì)菌菌落形態(tài)判斷溶血情況 α-溶血環(huán)：菌落周圍呈綠色，紅細(xì)胞不完全溶解 β-溶血

5、環(huán)：菌落周圍的培養(yǎng)基內(nèi)紅細(xì)胞完全被破壞 γ溶血：不溶血,,巧克力平板,主要用于嗜血桿菌的分離：含有Ⅴ、Ⅹ因子添加萬古霉素抑制革蘭陽性菌，但有時(shí)α-溶血的鏈球菌會(huì)形成草綠色溶血環(huán)大多數(shù)革蘭陰性菌都會(huì)生長(zhǎng),,淋球菌平板,用于分離淋病奈瑟菌加入萬古霉素和多粘菌素B溶液抑制革蘭陽性菌和真菌生長(zhǎng),,念珠菌顯色平板,分離酵母樣真菌鑒別培養(yǎng)基：不同的真菌顯示出不同顏色的菌落,,MAC平板,選擇性培養(yǎng)基：供腸道致病菌分離培養(yǎng)

6、 非發(fā)酵菌鑒別抑制劑——膽鹽：抑制革蘭陽性菌指示劑——中性紅：區(qū)分分解乳糖和不分解乳糖的細(xì)菌腸道致病菌不分解乳糖，非致病菌分解乳糖,,SS平板,強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基：用于志賀菌和沙門菌的分離抑制劑——枸櫞酸鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉協(xié)同作用與煌綠共同抑制腸道非病原菌及大部分大腸埃希菌。其中膽鹽還能抑制革蘭陽性菌。指示劑——中性紅沙門菌菌落特點(diǎn)：無色半透明，產(chǎn)H2S與培養(yǎng)基內(nèi)三

7、價(jià)鐵離子反應(yīng)呈黑色中心。志賀菌菌落特點(diǎn)：無色不透明或透明，邊緣整齊,,EMB平板,弱選擇性培養(yǎng)基抑制革蘭陽性菌伊紅和美藍(lán)兩種染料一酸一堿作為指示劑細(xì)菌分解乳糖時(shí)產(chǎn)酸，使伊紅美藍(lán)結(jié)合成紫紅色化合物，有時(shí)呈金屬光澤不分解乳糖的細(xì)菌菌落為無色或灰白色有的細(xì)菌產(chǎn)堿過多而出現(xiàn)藍(lán)色菌落,,TCBS平板硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養(yǎng)基,霍亂弧菌和副溶血弧菌分離培養(yǎng)堿性瓊脂膽酸鈉、牛膽粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭

8、氏陽性菌和大腸菌群氯化鈉可刺激弧菌的生長(zhǎng)以麝香草酚蘭和溴麝香草酚蘭為指示劑霍亂弧菌分解蔗糖產(chǎn)酸，菌落呈黃色半透明，圓形扁平，帶有黏性不易挑起副溶血弧菌不分解蔗糖，菌落呈藍(lán)綠色半透明，大而扁平，帶有黏性,,M-H平板水解酪蛋白瓊脂,用于細(xì)菌藥敏試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干擾磺胺類藥物測(cè)定控制鈣、鎂離子濃度，不干擾氨基糖苷類藥物測(cè)定,,M-H血平板,M-H瓊脂中加入5%脫纖維羊血用于鏈球菌藥敏試

9、驗(yàn),,轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基,阿米斯轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基：支原體培養(yǎng)拭子Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基：彎曲菌、沙門菌、志賀菌的標(biāo)本采集和保存緩沖甘油鹽水保存液：糞便標(biāo)本保存改良Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基：厭氧菌標(biāo)本,,培養(yǎng)基的選擇,大部分細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本：血平板、巧克力平板大便培養(yǎng)標(biāo)本：EMB、SS、MAC、TCBS酵母樣真菌培養(yǎng)標(biāo)本：念珠菌顯色平板淋球菌培養(yǎng)標(biāo)本：淋球菌平板中段尿標(biāo)本：血平板,培養(yǎng)基接種劃線,方法：平板分區(qū)劃線

10、 沾取標(biāo)本均勻涂布于平板培養(yǎng)基邊緣一小部分（為一區(qū)）；然后將接種環(huán)火焰滅菌，待冷后只通過一區(qū)2 ～3 次后連續(xù)劃線（為二區(qū)）；依次可供劃線3 ～5 區(qū)，火焰滅菌接種環(huán)。目的：分離出單個(gè)菌落,培養(yǎng)基接種劃線,方法：穿刺接種 用經(jīng)滅菌后的接種針挑取菌落或培養(yǎng)物，由培養(yǎng)基中央刺到距管底約0．3 ～0．5cm 處，然后沿穿刺線退出接種針。目的：用于微量生化管接種,培養(yǎng)基接種劃線,方法：液體接種用左手持培養(yǎng)基與菌種管，右

11、手持接種環(huán)，其小指與無名指及無名指與中指之間各拔取并夾持一個(gè)棉塞，火焰滅菌試管口， 以滅菌冷卻后的接種環(huán)沾取菌種，傾斜液體培養(yǎng)基管，先在管壁與液面交界處研磨（研磨處以試管直立后液體能淹沒接種物為主），然后再在液體中擺動(dòng)2 ～3 次接種環(huán)，塞好棉塞后輕輕混合即可。目的：細(xì)菌增菌及保存,培養(yǎng)基接種劃線,方法：涂布接種 用無菌棉簽浸滿菌液，在試管壁上擠去少量菌液后均勻涂布于平板上。目的：用于紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)、院感監(jiān)測(cè),培養(yǎng)基接