非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

1、第十一章 G+需氧桿菌,第一節(jié) 炭疽芽胞桿菌 炭疽是人畜共患病，由于疫苗接種和衛(wèi)生條件改善，發(fā)病率明顯下降，但可作為生物武器。炭疽一年均可發(fā)生。人通過食入病菌污染的食物；也可因接觸帶芽胞的皮毛、塵土、干燥菌粉郵件和吸入氣溶膠而感染。可引起皮膚炭疽，胃腸炭疽，肺炭疽，可并發(fā)敗血癥和腦膜炎。,一、微生物特性,1.本菌為致病性細(xì)菌中最大的G+桿菌。兩端平截，無鞭毛，呈竹節(jié)狀排列，芽胞位于菌體中央，有毒菌株有莢膜。 2.為

2、需氧或兼性厭氧菌，生長條件不嚴(yán)格,最適溫度為30℃～35℃，形成灰色、扁平干燥、不溶血粗糙型菌落，邊緣呈卷發(fā)狀，使明膠表面液化成漏斗狀。有毒菌株在血瓊脂平板上可產(chǎn)生莢膜，用接種針挑取時呈粘絲狀。,3.細(xì)菌性抗原,(1) 菌體多糖抗原耐熱、耐腐敗, 經(jīng)長時間煮 沸仍可與相應(yīng)免疫血清發(fā)生沉淀反應(yīng) (Ascoli熱沉淀反應(yīng))?？乖禺愋圆桓?能 與其他需氧性芽胞桿菌發(fā)生交叉反應(yīng),應(yīng) 用

3、時應(yīng)作綜合分析。 (2) 莢膜多肽抗原在體內(nèi)有抗吞噬作用,稱為 侵襲因子，有助于病菌在體內(nèi)繁殖擴(kuò)散 和建立感染。莢膜腫脹試驗對鑒定本菌 有一定意義。(3) 芽胞抗原具有免疫原性和血清學(xué)診斷價 值。,4. 炭疽毒素,由保護(hù)性抗原、致死因子和水腫因子三種蛋白質(zhì)形成的外毒素復(fù)合物，后兩者單獨(dú)不能發(fā)揮生物活性作用，都必須與保護(hù)性抗原組合才能引起實驗動物的水腫致死。,5. 抵抗力

4、本菌芽胞的抵抗力很強(qiáng)，在干燥土壤或皮毛中常溫下可存活數(shù)十年, 傳染性可持續(xù)數(shù)十年之久。芽胞對碘及氧化劑較敏感, 1：2500碘液、0.5％過氧乙酸10min即殺死。,1. 取病灶深部標(biāo)本或痰和血液；腸炭疽取糞便或嘔吐物；置65℃水溶30min，將非芽胞菌殺死，保留芽胞活性再進(jìn)行增菌和分離培養(yǎng)。 2. 直接鏡檢發(fā)現(xiàn)G+大桿菌、兩端平截、竹節(jié)狀排列形成長鏈，并有明顯莢膜，可見芽胞，芽胞為卵圓形，位于菌體中央菌體不膨

5、大，可作初步報告。 3. 分離培養(yǎng) 一般接種血瓊脂平板，35℃、18-24h后可觀察到較大、灰白色、邊緣不整齊和有輕微溶血的菌落。,二、微生物檢驗,(1)形態(tài)學(xué)特征：包括鏡檢形態(tài)和菌落形態(tài) （如上）。(2)生化試驗：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗 糖。有些菌株遲緩發(fā)酵甘油和水楊素， 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。能水解淀粉。不發(fā)酵鼠李 糖、半乳糖等其他糖類。能還原硝酸鹽 為亞硝酸鹽。VP試驗不定。不產(chǎn)生吲哚 和

6、硫化氫，不利用枸櫞酸鹽和分解尿素。 在牛乳中生長2-4天牛乳凝固后緩慢融 化。卵磷脂酶弱陽性、觸酶陽性。,鑒定,取用37 ℃ 、4-6h待檢肉湯培養(yǎng)物，涂布于普通瓊脂平板，將AP631炭疽噬菌體1滴，于平板中央劃一直線,置37℃18h，出現(xiàn)噬菌斑或噬菌帶者為陽性，每份標(biāo)本應(yīng)作2-3個同樣的試驗，同時滴種肉湯液作陰性對照。,(3) 噬菌體裂解試驗,將待檢菌接種于含青霉素0.05—0.5U/ml的培養(yǎng)基經(jīng)37℃培養(yǎng)

7、6 h后，炭疽桿菌可發(fā)生形態(tài)變化，顯微鏡下見大而均勻的圓球狀菌體呈成串樣排列，類炭疽桿菌無此現(xiàn)象。,(4) 串珠試驗,將待檢菌分別接種于青霉素5、10、100U／ml的普通瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24h，炭疽芽胞桿菌一般在含5U／ml的青霉素平板上仍能生長，在含10、100U／ml青霉素的平板上受到抑制而不生長。,(5) 青霉素抑制試驗,將待檢菌新鮮肉湯培養(yǎng)物0.1ml滴于預(yù)溫的兔血瓊脂平板上，用L形玻棒均勻涂布，干后用含青霉

8、素1 U／片紙片貼于平板，37℃1—2h，低倍鏡下觀察，可見紙片周圍有一無菌生長的抑菌環(huán)，其外周青霉素濃度低,菌體細(xì)胞壁受抑而成為串珠。平板繼續(xù)37℃孵育8-12h, 測量抑菌環(huán)直徑。,(6) 串珠青霉素抑制聯(lián)合試驗,（7）重碳酸鹽生長毒力試驗,將待檢菌接種于含O．5％NaHCO3和10％馬血清的瓊脂平板上，置10％CO2環(huán)境37℃24-48h，有毒株形成莢膜，菌落呈粘液型，無毒株不形成莢膜，呈粗糙型菌落。,炭疽芽胞桿菌

9、是惟一具有致病力，致病物質(zhì)為炭疽毒素，故對該毒素的檢測顯得十分重要 取純培養(yǎng)接種于肉湯培養(yǎng)液37℃24h,吸取0.1m1接種小鼠皮下,小鼠于72—96h發(fā)病并死亡 接種部位呈膠樣水腫，肝脾腫大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)，可檢出炭疽桿菌。,(8) 毒素動物試驗,(9)植物凝集試驗,炭疽桿菌菌體多糖是某些植物凝集素受體，用凝集素試驗檢測炭疽桿菌。常用的方法有熒光標(biāo)記試驗和酶聯(lián)凝集素吸附試驗

10、。本試驗可與其他類炭疽芽胞桿菌相鑒別。,(五) 藥物敏感性試驗,本菌對磺胺類、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、氯霉素和環(huán)丙沙星均敏感，大多能抑制芽胞和繁殖體的生長。,第二節(jié) 蠟樣芽胞桿菌,屬于需氧芽胞桿菌屬中的一種革蘭陽性桿菌，因在普通營養(yǎng)瓊脂平板上能形成芽胞，其菌落表面粗糙似白蠟狀，故名，簡稱蠟樣桿菌。廣泛分布于水、土壤、塵埃、淀粉制品、乳及乳制品等食品，并可在其中生長繁殖，引起食物中毒。近年來國內(nèi)也有引起菌血癥的報道。,一

11、、臨床意義 蠟樣芽胞桿菌引起的食物中毒有腹瀉型和嘔吐型兩型,由不耐熱的和耐熱的腸毒素引起，以夏秋季最為多見，中毒食物大多無腐敗變質(zhì),表現(xiàn)為完全正常的感官性狀，這點(diǎn)應(yīng)引起注意。,二、微生物特性,1. G+大桿菌，多數(shù)呈鏈狀排列。形成橢圓 形芽胞，位于菌體中心或次極端，不小 于菌體，引起食物中毒的菌株多為周毛菌, 有動力，不形成莢膜。2. 為需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普 通平板上35℃生長良好。菌

12、落較大，表面 粗糙似白蠟狀，,3. 能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、 水楊素、果糖等。能胨化牛乳, 液化明膠。VP試驗陽性，卵磷 脂酶陽性。4. 抵抗力強(qiáng), 能耐受100℃30min。,1. 采取可疑食物、糞便和嘔吐物進(jìn)行 檢驗，必須作活菌計數(shù)。暴露空氣 中的食品都受本菌污染。2. 標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢，其形 態(tài)待征為G+大桿菌、呈鏈狀排列、 芽胞圓形位于菌體中央或次

13、極端， 不大于菌體。,三、微生物檢驗,將菌稀釋液0．1ml注入空的無菌平皿，將溶化冷至45℃營養(yǎng)瓊脂適量傾人并立即混均，冷凝后置35℃培養(yǎng)24—48h，計數(shù)產(chǎn)生蠟樣光澤菌落乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升樣品所含活菌數(shù)。認(rèn)為105個／g或／ml時，即有發(fā)生食物中毒的可能。,3．活菌計數(shù),4. 分離培養(yǎng) 為需氧或兼性厭氧，營養(yǎng) 要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上即 能生長,最適溫度35℃,最適pH7.0-7.4,

14、 菌落表面有蠟光似毛玻璃狀蠟樣菌落, 進(jìn)行生化反應(yīng)鑒定必要時做血清學(xué)鑒 定和噬菌體分型。,對氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類和呋喃類耐藥。,四、藥物敏感性試驗,第二節(jié) 李斯特菌屬,包括產(chǎn)單核細(xì)胞、伊氏、無害、格氏、斯氏、威氏李斯特菌等，只有產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌對人和動物致病。,廣泛分布于自然界，常伴隨EB病毒引起傳染性單核細(xì)胞增多癥，也可引起腦膜炎，菌血癥等。污染奶制品引起食物中毒。也

15、可感染新生兒。致病物質(zhì)是溶血素和菌體表面成分。機(jī)體上靠細(xì)胞免疫清除李斯特菌。,一、臨床意義,二、微生物特性,1．為G+短小桿菌，成雙排列。偶爾可見雙球狀，有動力，不產(chǎn)生芽胞，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜。、2．為兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，在含有血液、血清、腹水等培養(yǎng)基上生長更好。最適生長溫度為30℃～37℃，因在4℃能生長故可進(jìn)行冷增菌。在血瓊脂平板上于35℃經(jīng)18-24h培養(yǎng)，形成狹窄的β-溶血環(huán)，灰白色菌落。,3

16、．生化反應(yīng),可發(fā)酵多種糖類，如葡萄糖、果糖、蕈糖、麥芽糖和水楊素，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，甲基紅和V-P反應(yīng)陽性，觸酶陽性，可使石蕊牛乳緩慢產(chǎn)酸并使其脫色，能水解精氨酸產(chǎn)氨： 不還原硝酸鹽，不形成吲哚，不液化明膠和凝固血清，不分解尿素，有時可產(chǎn)生硫化氫。25℃有動力，37℃無動力或緩慢。,4．抗原性,分為4個血清型，1型主要感染嚙齒動物，各型對人類均可致病，但以1a和lb最為多見，本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌及大腸埃希菌等具有共同抗原、

17、5．抵抗力 在土壤、糞便、飼料中能長期存活。耐鹽耐堿耐酸。對熱敏感，對—般消毒劑敏感，70％的乙醇5min即可殺 死本菌。,三、微生物檢驗,1．采集患者血液，腦脊液，分泌物或膿液，咽喉拭子；病死畜、禽病變組織等標(biāo)本。2．標(biāo)本直接檢查 為G+小桿菌，多數(shù)菌體一端膨大。呈兩極著色，易誤認(rèn)為雙球菌。3．分離培養(yǎng) 將標(biāo)本置4℃中冷增菌后再行分離，在血平板上形成較小圓形、光滑而有狹窄β-溶血環(huán)的菌落。,4.鑒定,當(dāng)遇到25℃培

18、養(yǎng)有動力的桿菌，而不符合G-桿菌鑒定時，應(yīng)考慮到李斯特菌。本菌因培養(yǎng)條件而呈鏈狀，37℃培養(yǎng)動力陰性，CAMP試驗陽性，常誤判為B群鏈球菌,產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌觸酶試驗為陽性。本菌具有耐堿耐鹽的特點(diǎn)，易誤判為糞腸球菌，糞腸球菌為觸酶試驗陰性，而產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌為陽性。,5.藥物敏感性試驗,本菌對多種抗生素敏感，以氨芐青霉素為首選，尚有青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素和紅霉素等敏感，對磺胺、桿菌肽和多粘菌素耐藥。,第三節(jié)丹毒絲菌屬,1．

19、包括紅斑丹毒絲菌、產(chǎn)單核細(xì)胞丹毒絲菌、扁桃體丹毒絲菌，其中紅斑丹毒擔(dān)菌是丹毒絲菌屬中的代表菌種。2．紅斑丹毒牡菌為紅丹毒絲菌病的病原，主要發(fā)生在魚類、家畜、家禽和兔類，人類也感染發(fā)病，接觸動物或其產(chǎn)品經(jīng)皮膚損傷而引起類丹毒。以局部感染為主，繼而發(fā)展成淋巴管炎，可轉(zhuǎn)變成關(guān)節(jié)炎。也可引起急性敗血癥或心內(nèi)膜炎。,3．細(xì)菌學(xué)檢查是診斷該病的重要依據(jù)。G+桿菌，厭氧或微需氧菌。初次分離要在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，在血瓊脂平板菌落周圍有綠色溶血環(huán)，觸酶及

20、氧化酶反應(yīng)均陰性。液化明膠，形成硫化氫。 4．本菌對濕熱及化學(xué)消毒劑很敏感。對青霉素、頭孢菌素、紅霉素和四環(huán)素等均敏感。,第四節(jié)陰道加特納菌,加特納菌屬僅有一個菌種陰道加特納菌。DNA中G+Cmol％為42～44。在陰道內(nèi)過度生長，造成陰道正常菌群微生態(tài)平衡失調(diào)，而引起非特異細(xì)菌性陰道病 ?？蓪?dǎo)致婦產(chǎn)科多種嚴(yán)重并發(fā)癥。如子宮全切術(shù)后感染、絨毛膜炎等。本菌還能引起新生兒敗血癥和軟組織感染。正常婦女陰道內(nèi)也能檢出本菌，因此，一般

21、情況下，不作陰道加特納菌分離。,1．革蘭陽性。無芽胞、無莢膜和鞭毛，具多形性。2．營養(yǎng)要求較高，兼性厭氧，在25℃～41℃中生長，在5％人血瓊脂上，置3％～5％CO2 35℃培養(yǎng)48h，可形成針尖大小的菌落。3．pH測定 若pH﹥4．5為可疑。4．胺試驗 將lOOg／L KOH l～2滴滴在待檢物上，若發(fā)出魚腥樣胺臭味即胺試驗陽性。,所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素和甲硝唑敏感；對萘啶酸、新霉素、