流行性出血熱診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則gb 15996—1995

1、流行性出血熱診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則GB15996—1995前言國際上將流行性出血熱(EHF)與流行性腎病(Nephopathiaepidemica，NE)等統(tǒng)稱腎綜合征出血熱(Hemrhagicfeverwithrenalsyhndrome，HFRS)。HFRS是由布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Hantavirus)中某些病毒引起和由某些嚙齒動物攜帶傳播的一類自然疫原性疾病。在我國流行的是EHF，黑線姬鼠和褐家鼠為其主

2、要宿主動物和傳染源，其傳播主要通過與宿主動物或其排泄物(尿、糞)分泌物(唾液)接融。EHF起病急，進展快，病死率高，早期診斷對降低病死率有著特殊的重要意義。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A，附錄B，附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄；附錄D是提示的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國衛(wèi)生部提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所、中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)和微生物學(xué)研究所、西安醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：宋干、杭長壽、陳化新、張成文。本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托

3、技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部傳染病監(jiān)督管理辦公室負(fù)責(zé)解釋。1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了流行性出血熱(EHF)的診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級、各類醫(yī)療、衛(wèi)生、保健機構(gòu)工作人員對EHF病人的診斷、預(yù)防和治療。2診斷原則依據(jù)患者的流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查結(jié)果的綜合判斷進行診斷，確診須有血清學(xué)或病原學(xué)檢查結(jié)果。3診斷標(biāo)準(zhǔn)3.1流行病學(xué)史發(fā)病在EHF疫區(qū)及流行季節(jié)，或病前兩月內(nèi)有疫區(qū)旅居史，或病前兩月內(nèi)有與鼠類或其排泄物(尿、糞)分泌物(唾液)直接或

4、間接接觸史。3.2臨床表現(xiàn)3.2.1早期癥狀和體征：起病急，發(fā)冷，發(fā)熱(38℃以上)；全身酸痛，乏力，呈衰竭狀；頭痛，眼眶痛，腰痛(三痛)；面、頸、上胸部充血潮紅(三紅)，呈酒醉貌；眼瞼浮腫、結(jié)膜充血，水腫，有點狀或片狀出血；上腭粘膜呈網(wǎng)狀充血，點狀出血；腋下皮膚有線狀或簇狀排列的出血點；束臂試驗陽性。3.2.2病程經(jīng)過：典型病例有發(fā)熱期、低血壓期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期五期經(jīng)過。前三期可有重疊，并存在有大量五期不全的異型或輕型非典型病

5、例。3.3實驗室檢查3.3.1血檢查：早期白細(xì)胞數(shù)低或正常，3～4病日后明顯增多，桿狀核細(xì)胞增多，出現(xiàn)較多的異型淋巴細(xì)胞；血小板明顯減少。3.3.2尿檢查：尿蛋白陽性，并迅速加重，伴顯微血尿、管型尿。3.3.3血清特異性IgM抗體陽性，見附錄A。3.3.4恢復(fù)期血清特異性IgG抗體比急性期有4倍以上增高，見附錄A。3.3.5從病人血液白細(xì)胞或尿沉渣細(xì)胞檢查到EHF病毒抗原或EHF病毒RNA，見附錄D。12H(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)O51.

6、6g，NaH(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)PO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)2H(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)O8.7g，NaCl76g，Tween－205mL，溶解至1000mL)高壓后使用，臨用前10倍稀釋。i)稀釋液：上述10倍稀釋的PBS－T液，含5％牛血清。j)底物液：臨用前取檸檬酸磷酸鹽緩沖液(pH5.0)(檸檬酸10.2g，Na(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)HPO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)12H(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)O36.8g，加水至1000mL)。k)終

7、止液：2molLH(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)SO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)。A1.3檢測步驟a)用0.1molpH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋抗人IgM(μ鏈)單克隆抗體(或羊抗人IgM(μ鏈)，包被聚苯乙烯塑料板，每孔100μL，4℃過夜(或37℃2h)。b)棄去包被液，用洗滌液重復(fù)洗3次，甩干。c)加待檢血清：將血清用PBS－T液稀釋100倍，分別加入2反應(yīng)孔，每孔100μL(如需設(shè)陽性和陰性血清對照亦同此法處理)，37℃1h。d)棄去血清，用

8、洗滌液重復(fù)洗5次，甩干。e)加陽性抗原及陰性抗原：將陽性抗原用稀釋液稀釋至適當(dāng)工作濃度，加入其中一反應(yīng)孔100μL；陰性抗原同樣稀釋，加入另一反應(yīng)孔，37℃水浴孵育2h或者置4℃過夜(效果更優(yōu))。f)棄去抗原，用洗滌液重復(fù)洗5次，甩干。g)加HRP－MCAb：將HRp－McAb用稀釋液稀釋至工作濃度，每孔加入100μL37℃1h。h)棄去標(biāo)記物，用洗滌液洗5次，甩干。i)顯色：每孔加入100μL新鮮配制的底物溶液。放在室溫暗處顯色。j)

9、當(dāng)觀察到陽性抗原(或血清)對照顯黃色而陰性抗原(或血清)對照為無色后，每孔加入50μL2molLH(下標(biāo)始)2(下標(biāo)終)SO(下標(biāo)始)4(下標(biāo)終)終止反應(yīng)。A1.4結(jié)果判斷a)酶標(biāo)檢測儀測定OD值(空白對照調(diào)零)，PN＝2.1判為陽性(P：陽性抗原孔OD值；N：陰性抗原孔OD值)。b)目測法：與對照孔比較，陽性抗原孔明顯呈淡黃，桔黃或深黃色，陰性抗原孔基本無色。A1.5意義IgM抗體陽性表示患者新近感染EHF病毒。本法具有高度敏感性和特

10、異性，特別適用于EHF早期特異性診斷。A2應(yīng)用間接酶免疫吸附試驗(ELISA)檢測EHFIgG抗體A2.1原理根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，用純化病毒抗原包被塑料板，與1∶100連續(xù)稀釋的待檢血清中的特異性抗體結(jié)合，其中血清IgG部分又與后加入的酶標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合，通過酶與底物的作用產(chǎn)生可見的顏色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物的多少，即顏色深淺進行抗體的定量測定。A2.2材料a)聚苯乙烯塑料板及可變微量加樣器：同A1.2。b)包被陽性抗原和正常