biolog微生物鑒定步驟

1、Biolog微生物鑒定步驟微生物鑒定步驟一檢測原理檢測原理Biolog微生物鑒定系統(tǒng)測試的是微生物在鑒定板中利用或氧化化和物的能力。測試會(huì)產(chǎn)生特征性的紫色孔模式，組成代謝指紋。所有必需的營養(yǎng)物質(zhì)和生化試劑都預(yù)先加進(jìn)96孔板中，四唑紫是一種氧化還原染料，指示碳源的利用情況。.鑒定步驟非常簡單，純化分離到的菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，再制成接種液加到鑒定板中。在培養(yǎng)過程中，一些孔中的化學(xué)物質(zhì)能被氧化并將顯色物質(zhì)成紫色，對(duì)照孔（A1）和陰性孔仍然為無色。

2、鑒定板在相應(yīng)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)46小時(shí)或1624小時(shí)即可形成代謝模式。系統(tǒng)軟件自動(dòng)和數(shù)據(jù)庫對(duì)比，如果能找到合適的匹配，就可以得出一個(gè)鑒定結(jié)果。二所需器材和消耗品：所需器材和消耗品：?培養(yǎng)基、接種液、巰基乙酸鈉、長棉簽、接種棒、儲(chǔ)液槽、八道移液器、移液器頭、濁度儀、濁度標(biāo)準(zhǔn)品、控溫培養(yǎng)箱和相應(yīng)的鑒定板。其中接種液自行配制，接種棒、儲(chǔ)液槽可選用國產(chǎn)品牌代替。三鑒定步驟：鑒定步驟：Biolog微生物鑒定樣品處理步驟微生物鑒定樣品處理步驟分離純化

3、培養(yǎng)基BUGB通用培養(yǎng)基加羊血BUAB厭氧培養(yǎng)基加羊血BUY酵母培養(yǎng)基2%ME2%的麥芽汁提取物革蘭氏染色和菌落菌株形態(tài)觀察革蘭氏染色結(jié)果革蘭氏陰性厭氧菌確認(rèn)實(shí)驗(yàn)氧化酶反應(yīng)陽性確認(rèn)實(shí)驗(yàn)氧化酶反應(yīng)陰性、三糖鐵實(shí)驗(yàn)KK或KAw氧化酶反應(yīng)陰性、三糖鐵實(shí)驗(yàn)AA或KA需在巧克力培養(yǎng)基上或需要6.5%CO2培養(yǎng)革蘭氏陽性酵母菌絲狀真菌道里分離出來的，如ActinobacillusAlysiellaBrucellaCapnocytophagaCDCG

4、roupDF3CDCGroupEF4EikenellaHaemophilusKingellaMaxellaNeisseriaSimonsiellaSuttonella和Taylella。如果是革蘭氏陽性菌，用革蘭氏染色可以很容易的區(qū)分球菌和桿菌，推薦再做一個(gè)過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)，最終確定是球菌還是桿菌。通過革蘭氏染色或觀察菌落形態(tài)可以區(qū)分出芽孢桿菌。微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)該用Biolog推薦的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，以便使微生物達(dá)到最佳的代謝活性，進(jìn)而

5、準(zhǔn)確的和數(shù)據(jù)庫中的代謝模式匹配。微生物應(yīng)該是新鮮的，確保其處于指數(shù)增長期，因?yàn)橐恍┚暝谶_(dá)到穩(wěn)定期時(shí)會(huì)失去生存能力或代謝活性，推薦的培養(yǎng)周期為424個(gè)小時(shí)。如果擴(kuò)大培養(yǎng)的量不足以配制相應(yīng)的濁度，可以培養(yǎng)多個(gè)平板，培養(yǎng)時(shí)間可以延長到48個(gè)小時(shí)。第二步：第二步：首先確定濁度儀沒開啟電源的時(shí)候，指針應(yīng)指在0%，如果沒有，用螺絲刀調(diào)整。開啟電源，取未開蓋的裝有接種液的試管，擦干凈管壁，放入濁度儀，指針應(yīng)指在100%，如果沒有，旋動(dòng)右方旋鈕?。然

6、后用濁度標(biāo)準(zhǔn)管檢驗(yàn)，讀數(shù)在2%都是正常的。要使用哪管接種液，就用相應(yīng)的試管做100%校正，不要在濁度儀的光路中旋轉(zhuǎn)試管。?在鑒定革蘭氏陰性腸道菌和苛生菌的時(shí)候，在接種液里應(yīng)該加準(zhǔn)確三滴巰基乙酸鈉。巰基乙酸鈉的作用是抑制芽孢形成，并且可以部分或完全的抑制A1或其它孔由于微生物利用自身分泌的聚多糖莢膜而出現(xiàn)的紫色。一些非腸道菌液需要添加巰基乙酸鈉。按照下列步驟制備均勻的菌懸液：用接種液將棉簽稍微浸濕，用棉簽在菌落上面輕輕的滾動(dòng)可以將菌落取到

7、接種液中，從而不會(huì)將培養(yǎng)基或其它營養(yǎng)物質(zhì)帶入接種液。先取單菌落，不夠再取生長緊密的菌落。在試管內(nèi)壁接種液液面的上方，旋轉(zhuǎn)擠壓棉簽可以將菌落團(tuán)分散。然后上下移動(dòng)棉簽，將分散的菌落和接種液充分混合形成均一，無菌團(tuán)的菌懸液。如果菌懸液有菌團(tuán)，可以讓菌團(tuán)沉到管底。??調(diào)整濁度直至達(dá)到允許的范圍，增加接種液或添加菌落可以降低或升高菌懸液的密度。??將菌懸液接種到鑒定板上，不要超過20分鐘。如果長時(shí)間部接種到鑒定板上，一些菌會(huì)失去代謝活性。第三步：