臨床微生物樣本采集規(guī)范201312-上傳sific

1、臨床微生物樣本采集規(guī)范,,2014-1-15,成功治療感染癥的決定因素,準確、快速病原學診斷醫(yī)師判讀病原菌培養(yǎng)結(jié)果選擇適當治療方法,準確、快速病原學診斷的決定因素,,二大因素,臨床醫(yī)務人員提高送檢意識標本采集運送儲存,微生物室人員標本接收篩選處理分離鑒定……,臨床醫(yī)生最不能接受的問題:陽性率低,,,“正確的微生物學檢驗始自正確的標本采取。臨床醫(yī)師、護師及檢驗技師都必須通曉其要領?！?著名的臨床微生物檢驗專著Manua

2、l of Clinical Microbiology 的主編Patrick Murray,合格標本的結(jié)果才能引導（而非誤導）做出正確的臨床決定,我們應該追求：“準確的病原學診斷”“針對性病原學治療” 正確的微生物標本采集和運送，是準確的病原學診斷的前提！,病原學診斷的關鍵問題,減少污染鑒別污染和定植 提高陽性率臨床及時有效治療治療感染而非污染治療感染而非定植降低患者死亡率,標準化的流程,病原學治療,

3、微生物樣本采樣基本原則,1.及時采集微生物標本作病原學檢查2.在抗菌藥物使用前采集標本3.采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作4.采樣后立即送檢，甚至床旁接種尤其是厭氧培養(yǎng)5.棉拭子標本宜用運送培養(yǎng)基6.混有正常菌群污染標本，不可置肉湯培養(yǎng)7.標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。8.送檢標本應注明來源和檢驗目的,臨床微生物標本的分類,帶菌體液 無菌體液 痰 血液 咽拭子

4、 腦脊液 尿液 關節(jié)腔積液 糞便 胸腹水 其他類別 其他類別,一、血培養(yǎng)操作規(guī)范,,,,①血培養(yǎng)主要病原菌：沙門菌、布氏桿菌、其他革蘭陰性桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以下菌應視為非病原菌(除非>1次血培養(yǎng)分離出)：芽孢桿菌屬、凝固酶陰性葡萄球菌、草綠色鏈球菌、棒狀革蘭陽性桿菌,,,從兩

5、個獨立的皮膚位點采血，每瓶采集10ml,#1,35°C 空氣中孵育5天每天檢查濁度并翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,#2,#3,18小時后傳進行次代培養(yǎng)當培養(yǎng)瓶顯示細菌生長時進行革蘭染色和傳代培養(yǎng),,,革蘭陽性球菌?接種血平皿＋奧普托欣試驗,,革蘭陰性桿菌?接種血平皿和麥康凱平皿,革蘭陰性雙球菌或球桿菌?接種巧克力平皿和血平皿,,CO2中孵育72h,#5,#4,將重要的革蘭染色結(jié)果盡快通知臨床醫(yī)生,對重要病原菌進行鑒定和藥敏試驗,#6,例

6、如：肺炎克雷伯菌,例如：肺炎鏈球菌,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,血培養(yǎng)的臨床意義,血培養(yǎng)查病原菌對診斷以下疾病很重要 -菌血癥，真菌血癥 -感染性心內(nèi)膜炎 -臨床不明原因感染 -假體植入后感染（人工關節(jié)，人工瓣膜） -導管相關性菌血癥 -化膿性關節(jié)炎 -肺炎血培養(yǎng)是診斷敗血癥最有價值的手段,臨床常

7、見的采血指征,發(fā)熱（?38?C）或低溫（?36?C） 寒戰(zhàn) 白細胞增多（計數(shù)大于10，000?109/L，特別有“核左移” 未成熟的或桿狀核的白細胞） 粒細胞減少（成熟的多核白細胞<1000?109/L） 血小板減少 皮膚粘膜出血 昏迷 ，休克多器官衰竭 CRP/PCT升高,血培養(yǎng)送檢指征（須100%送檢率）,⑴ 發(fā)熱≥38.5℃伴下列一項 A. 寒戰(zhàn) B. 肺炎：肺部感染的患者有25～50％可能發(fā)生菌血

8、癥，應同時作血培養(yǎng)。 C. 留置深靜脈導管超過5天 D. 白細胞＞1.8萬/mm3 E. 感染性心內(nèi)膜炎 F. 收縮壓低于90mmHg G. 無其它原因可以解釋的感染⑵ 發(fā)熱≥39.5℃須抽血培養(yǎng),美國微生物協(xié)會：臨床微生物手冊,急性發(fā)熱：在10分鐘內(nèi)從不同的部位抽2套血培養(yǎng)（使用抗菌藥物前）；非急性疾?。翰灰R上開始或換抗菌藥物：從不同部位抽取2-4套血培養(yǎng)，在24小時內(nèi)間隔3小時以上（使用抗菌藥物前）；不明原

9、因的發(fā)熱：不同部位抽取2-4套血培養(yǎng)，如果24-48h陰性，再次抽取2-3套或更多血培養(yǎng),皮膚消毒程序，嚴格執(zhí)行三步法:,1、用75%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上 2、用1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用60s，從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區(qū)域面積達5cm* 5cm，涂擦穿刺皮膚2遍，待干燥。3、75%酒精脫碘：用75%酒精由內(nèi)向外方向涂抹去碘酒液 ，待酒精揮發(fā)干燥后采血。,徐英春，倪語星等。血培養(yǎng)操作規(guī)范，上?？茖W技術出

10、版社，2002,1-31,培養(yǎng)瓶消毒程序,打開血培養(yǎng)瓶塑料蓋用75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞并擦干表面殘余酒精→消毒皮膚后用無菌注射器抽取血液從橡皮塞處注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)→用75%酒精重新消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞并蓋好塑料蓋→立即送檢。,血培養(yǎng)標本的運送,采集后的血培養(yǎng)瓶應在1小時之內(nèi)送往實驗室。血培養(yǎng)瓶在采血接種后在室溫不超過4小時。血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏或冷凍。,采血時機和采血份數(shù),采血培養(yǎng)應該在使用抗生素之前進行間歇性寒戰(zhàn)或

11、發(fā)熱應在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5小時采集血液，不知發(fā)熱規(guī)律應在寒戰(zhàn)或發(fā)熱后半小時后進行。 24小時內(nèi)采集2-3份血培養(yǎng)持續(xù)性菌血癥：如急性心內(nèi)膜炎、導管相關sepsis時需多次取血監(jiān)測，特別是金葡菌時,采集兩套血培養(yǎng)(CLSI),從兩個獨立的皮膚位點采血，每瓶采集10ml最好在5分鐘內(nèi)采集。,,,血培養(yǎng)采血量、份數(shù)與陽性率,研究表明，當每套血培養(yǎng)采血20ml時一套檢出率：65%二套檢出率：80%三套檢出率：96%目前的

12、指南推薦采集2~3套血培養(yǎng),采集部位,推薦從外周靜脈采集血液標本。不推薦動脈血，因其診斷價值沒有比靜脈血更大。不推薦靜脈留置導管，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導管內(nèi)采血，也應同時從外周靜脈采集另外一個血培養(yǎng)標本以幫助陽性結(jié)果的判讀。,血液及骨髓標本采集運送的規(guī)范（1）,1.采血時間：盡可能在用抗生素前，心內(nèi)膜炎例外。2.采血量：采一次或采一瓶是錯誤的，至少應采一套2瓶，分需氧和厭氧。2瓶血量不少于16-20ml，先將10ml

13、注入需氧瓶，再將剩余血采血注入?yún)捬跗俊?.采血方法：不要與血氣和血沉標本一起采血；不推薦血入瓶前換針頭；不推薦靜脈血直接入瓶；不宜在靜脈導管或靜脈留置口采血。,血液及骨髓標本采集運送的規(guī)范（2）,4.采血間隔：如第一次采集2套（4瓶）血培養(yǎng)標本，在以后的2-5天不必采血，但除外心內(nèi)膜炎和導管相關性敗血癥。5.兒童：采血量是總血量的1%。6.延遲培養(yǎng)瓶處理: 延遲培養(yǎng)瓶不要放冰箱或孵箱，放常溫，盡早送往臨床細菌室。7.皮膚消毒液推

14、薦：建議先用70-80%異丙醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。,污染細菌,血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細菌陽性:凝固酶陰性葡萄球菌棒狀桿菌 微球菌丙酸桿菌 芽孢桿菌,防止皮膚寄生菌或環(huán)境微生物污染 血培養(yǎng)皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管、導管,血培養(yǎng)假陽性的危害,1、增加患者抗生素用量，破壞其微生態(tài)環(huán)境2、延長了住院天數(shù)3、延誤病情診斷4、增加經(jīng)濟負擔,導管相關性血流感染 （CRBSI）,如果1套以

15、上血培養(yǎng)和導管片段培養(yǎng)陽性，并且菌種鑒定與藥敏譜相同，則可能為CRBSI。 如果1套以上血培養(yǎng)陽性且導管片段培養(yǎng)陰性，若血培養(yǎng)陽性株為金黃色葡萄球菌或念珠菌，則 有可能為CRSBI。如果血培養(yǎng)陰性，導管片段培養(yǎng)陽性，提示定植，不是CRBSI。,二、泌尿道感染標本采集規(guī)范,,,#1,b,a,b,⑨Urine Culture尿培養(yǎng)主要病原菌：大腸埃希菌，變形桿菌，克雷伯菌，其他革蘭陰性桿菌，腸球菌，腐生葡萄球菌，純的金黃色葡萄球菌,#

16、2,接種血平皿和麥康凱平皿,,#3,空氣孵育24小時,收集中段尿,a,#4,菌落計數(shù),0.001ml接種環(huán),若? 2 種菌生長，對每種菌進行鑒定和藥敏試驗；若>2種菌生長，報告“混合菌群”,#5,注意:,革蘭陰性桿菌在血平皿和麥 康凱平皿上均生長良好革蘭陽性球菌僅在血平皿上生長良好,GNR,,,#6,,,,,,75,000 cfu/ml,50,000 cfu/ml,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

17、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,100,000 cfu/ml,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,© Ellen Jo Baron 2007;

18、 Use with proper attribution,GPC,尿道感染,,每年850萬例尿路感染, 90%為女性1/2.5個婦女在一生中會得UTI下行性感染：血流?腎臟?膀胱（金黃色葡萄球菌，酵母菌，結(jié)核分枝桿菌）上行性感染：尿道?膀胱?腎盂? 血流,尿液培養(yǎng)標本送檢指征,1 有典型的尿路感染癥狀；尿頻，尿急，尿痛2 肉眼膿尿或血尿；3 尿道口有膿性分泌物；4 不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀；5 留置導尿管的病人出現(xiàn)發(fā)

19、熱；6 尿常規(guī)異常：白細胞，細菌計數(shù)，亞硝酸鹽。,您知道嗎？,正常人尿液是無菌的，而尿液細菌培養(yǎng)最大的問題是雜菌污染。正常人外尿道有大腸桿菌、葡萄球菌等存在。而這些細菌又是尿路感染中常見的病原菌。要作好尿液細菌學檢查，首先應注意標本收集問題。,您知道嗎？,尿液經(jīng)尿道排出時會受到尿道內(nèi)正常菌群的污染,但定量培養(yǎng)時計數(shù)不會超過103 CFU /m l, 泌尿系感染時定量培養(yǎng)在104 ～ 105 CFU /m l 。由于絕大多數(shù)的泌尿

20、系感染是由腸桿菌科細菌引起,而此類細菌的硝酸鹽還原實驗為陽性,故可參考尿常規(guī)檢查中的硝酸鹽還原實驗來推斷是否有細菌感染。,尿培養(yǎng)樣本采集方法（1）,標本采集應力爭在未使用抗生素之前．注意避免消毒劑污染標本 1 清潔中段尿中段尿（晨尿最佳）約10 ～ 20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。2 恥骨上膀胱穿刺：評估膀胱內(nèi)細菌感染的“金標準”方法。3 直接導尿：可減少污染，準確反映膀胱感染情況。,尿培養(yǎng)樣本采集方法（2

21、）,4 留置導尿管收集尿液：穿刺導尿管吸取尿液，不能從收集袋中采集尿液。長期留置導尿患者，應在更換新尿管時留取尿標本。5 集尿法：尿查抗酸桿菌時，留24小時尿液盛于潔凈容器內(nèi)，取其沉渣10mL送檢。,泌尿標本采集的規(guī)范 （1）,1、標本采集后應立即送檢，否則可暫存于4℃冰箱。 2、采集時間：使用抗菌藥物前采集。應采集早晨第一次的尿。3、標本管不應含防腐劑和消毒劑。,泌尿標本采集的規(guī)范（2）,4、采集中段尿時要先用肥皂清洗女性的外陰

22、和男性的外生殖器，然后用清水沖洗。5、長期留置導尿管的患者應在更換新管時留取尿標本。6、 做厭氧培養(yǎng)時應膀胱穿刺采集尿。,特別注意（1）,尿液通常是無菌的或一過性有少量微生物，但是尿道內(nèi)或尿道周圍皮膚的菌群會污染尿液標本，從而可能導致錯誤的培養(yǎng)結(jié)果。診斷癥狀明顯的病人（如尿急、尿頻、尿痛），一份標本就已足夠，治療48 ～ 72小時后再采集第二份標本。對于癥狀不明顯的病人，需采集2 ～ 3份標本。懷疑腎結(jié)核時，應連續(xù)3天采集晨尿。,

23、特別注意（2）,多次收集或24小時尿不能用作培養(yǎng)。申請單上必須注明病人癥狀是否明顯，這對于定量培養(yǎng)分析非常重要，尤其只有少量尿液標本。室溫都有利于病原菌和污染菌生長繁殖，因此若30min內(nèi)不能及時培養(yǎng)尿液則必須冷藏，但也不能超過24小時。,特別注意（3）,多數(shù)藥物從尿道排泄,所以標本采集應力爭在未使用抗生素之前或停用抗菌藥5d之后留取尿液標本;尿液在膀胱內(nèi)應停留6 ～ 8h以上，使細菌有足夠的時間繁殖,故應盡量采集早晨第一次的尿,同

24、時注意避免消毒劑污染標本。,三、下呼吸道分泌物（痰培養(yǎng)）標本采取規(guī)范,肺部感染病原學診斷有哪些項目？,顯微鏡檢查 -革蘭染色 -濕片檢查 -分枝桿菌檢查 -肺孢子菌檢查培養(yǎng) -細菌與真菌，普通菌，厭氧菌，結(jié)核菌，真菌 -定量/半定量培養(yǎng),免疫學方法 -抗原，尿可溶性抗原，GM，隱球菌 -抗體：肺吸蟲組織病理學 -結(jié)核與其它分枝桿菌 -真菌（曲霉，隱球菌

25、）分子生物學：核酸檢測,⑤痰標本主要病原菌：肺炎鏈球菌，克雷伯菌屬，流感嗜血桿菌，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌。非病原菌：酵母菌，草綠色鏈球菌，凝固酶陰性葡萄球菌,病人需用水清潔口腔，深咳肺部痰，不要唾液,#1,進行革蘭染色以評價標本是否適于接種。向臨床醫(yī)生盡快報告重要的革蘭染色結(jié)果,#2,#3,,好：很少扁平上皮細胞,奧普托欣紙片,CO2中孵育48小時,#4,接種巧克力平皿，血平皿和麥康凱平皿,#5,拒絕：大量

26、扁平上皮細胞,,肺炎克雷伯菌,對重要病原菌進行鑒定&藥敏試驗,金黃色葡萄球菌,肺炎鏈球菌,膽汁溶菌＋,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,奧普托欣＋,,流感嗜血桿菌,下呼吸道標本標本送檢指征,1 咳嗽、咳痰：痰液可為膿性、血性、鐵銹色或紅棕色膠胨樣痰。2 咯血：肺結(jié)核病人常痰中帶血。3 呼吸困難4 發(fā)熱5 胸痛：當炎癥病變累及壁層胸膜時，會發(fā)

27、生胸痛。肺部感染的患者有25 ～ 50％可能發(fā)生菌血癥，應同時作血培養(yǎng)。,社區(qū)獲得性肺炎臨床路徑（2009年版）,1.必需檢查項目：（1）血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)；（2）肝腎功能、血糖、電解質(zhì)、血沉、C反應蛋白（CRP）、感染性疾病篩查；（3）病原學檢查及藥敏；（4）胸部正側(cè)位片、心電圖。2.根據(jù)患者情況進行：血培養(yǎng)、血氣分析、胸部CT、D-二聚體、血氧飽和度、B超、有創(chuàng)性檢查等。,病原體種類繁多而復雜,使下呼吸道感染病原診

28、斷成為難題,細菌（包括軍團菌、厭氧菌與分枝桿菌）真菌（包括曲霉，隱球菌、肺孢子菌）病毒支原體、衣原體與立克次體原蟲寄生蟲,咳痰途經(jīng)口咽部,唾液中口咽部定植菌的濃度可達108 ～ 109/ml。研究顯示，國內(nèi)常規(guī)痰標本中約半數(shù)存在唾液嚴重污染現(xiàn)象。,不可避免地受到污染,我國痰細菌培養(yǎng)現(xiàn)狀,厭養(yǎng)菌檢出率極低結(jié)果重復性差報告速度慢感染菌與污染菌不易區(qū)分藥敏結(jié)果與治療反應存在差距,咳痰標本的采集,標本采集方法醫(yī)師或護士直視

29、下采集標本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液臨床上約半數(shù)咳痰標本不合格！,關于咳痰標本,在抗生素應用前采集痰標本;標本采集后1 ～ 2h內(nèi)必須立即進行實驗室處理；咳痰標本應用最早且廣泛，但也是最受爭議的標本取標本前應摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口;深咳，采集標本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務人員指導;無痰可用3％ ～ 5％NaCl 5ml霧吸約5min導痰；也可用物理療法、體位引流、鼻導管抽吸等法

30、取痰；,咳痰標本不合格，退檢嗎？,如果低倍視野下鱗狀上皮細胞大于25個，白細胞小于10個，應不做或僅在特殊要求時做培養(yǎng)。如做培養(yǎng)，報告中注明“鏡檢結(jié)果表明標本口咽分泌物污染明顯”。,下呼吸道標本采集方法（1）,1 自然咳痰法：晨痰、漱口，深咳呼吸道深部痰（非后鼻部分泌物、非唾液）留于無菌容器內(nèi)。對于痰量少或無痰的患者可采用霧化吸入45℃ 3％ ～ 5％鹽水溶液，使痰液易于排出。2 支氣管鏡采集法：經(jīng)支氣管鏡直接吸引支氣管肺泡灌洗

31、防污染樣本毛刷,下呼吸道標本采集方法（2）,3 胃內(nèi)采痰法：無自覺癥狀的肺結(jié)核病人尤其嬰幼兒不會咳嗽，有時將痰誤咽入胃中，可采集胃內(nèi)容物做結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)。4 氣管穿刺法：主要用于厭氧菌培養(yǎng)5 小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。,痰培養(yǎng)的送檢次數(shù),對于普通細菌性肺炎，痰標本送檢每天1次，連續(xù)2 ～ 3天。不建議24h內(nèi)

32、多次采集，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)改變；懷疑分枝桿菌感染者，應連續(xù)收集3天清晨痰液送檢；懷疑軍團菌或深部真菌感染，痰標本理想的送檢次數(shù)尚無定論。,痰培養(yǎng)的運送和保存,所有病人的下呼吸道標本應在采集后立即送至微生物室，并于1小時內(nèi)接種如不能及時送達，應將標本暫存于4℃，但放置時間不可超過24h。運輸時勿置于冰塊中被口咽部菌群污染的標本如咳痰等不可用于厭氧菌培養(yǎng)。室溫下放置>1h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌的分離率而定植于上呼

33、吸道的非致病菌則會過度生長,四、大便培養(yǎng)標本采集規(guī)范,,#1,#2,接種血平皿，麥康凱平皿，Hektoen或DCA，若懷疑弧菌則還接種TCBS平皿。37 ° C 空氣孵育48h,#3,糞便標本采集后30分鐘內(nèi)進行接種或置于cary-blair運輸培養(yǎng)基中,#4,③糞便培養(yǎng)重要的病原菌：沙門菌、志賀菌、彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、產(chǎn)毒性大腸桿菌&難辨梭菌（在常規(guī)的實驗室可能檢測不出）,選擇血性或膿性的部分進行接種,

34、血平皿上氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌需進一步鑒定將菌落接種TCBS或含0-6％鹽濃度的肉湯中。,麥康凱、HEK或DCA平皿上不利用乳糖的革蘭陰性桿菌需進一步鑒定。,氧化酶陽性、濕潤的米色菌落,革蘭染色顯示彎曲或螺旋形的桿菌彎曲桿菌屬,,Campy瓊脂,#6,,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,#5,將菌落接種至Campy瓊脂或使用濾紙法。微需氧環(huán)境下37-42

35、° C 孵育 72 h,,③,大便培養(yǎng)標本采集規(guī)范（1）,1.采集時間：腹瀉患者應在用藥前、急性期采集；沙門菌感染、腸熱癥應在2周內(nèi)采；厭氧菌出現(xiàn)癥狀即采集。2.采集方法：①直腸拭子法：用無菌拭子蘸生理鹽水濕潤，由肛門插入約 6～7cm，輕輕在直腸內(nèi)旋動取出大便少許，放入無菌便盒中，加蓋封口送檢。②自然排便者可用小木棒挑取有膿血和黏液的部位的糞便2-3克，如液狀糞便取絮狀物盛于無菌的、密封的、不吸水的、容器內(nèi)或直接盛于增

36、菌液或保存液中。,大便培養(yǎng)標本采集規(guī)范（2）,3.  注意事項：⑴雖然糞便標本本身含很多細菌但也要用無菌容器。⑵在患者病情許可的條件下應在用藥前采集標本。⑶應床邊接種或置輸送培養(yǎng)基送檢。⑷厭氧細菌（難辯梭菌）培養(yǎng)的標本應盡量減少與空氣接觸。,五、腦脊液標本采集,②腦脊液（CSF)培養(yǎng)主要病原菌：B群β溶血鏈球菌（新生兒），流感嗜血桿菌（2月-2歲兒童），肺炎鏈球菌，腦膜炎奈瑟氏菌,最少1ml，最佳>5ml,醫(yī)生

37、通過無菌皮膚穿刺采集腦脊液（腰椎穿刺）于無菌管中。第二管和第三管用于微生物學檢測。,# 1,1500×g離心15分鐘（可能的話）,# 2,# 3,用吸管吸去上清，留下1cc的腦脊液沉淀,X,注意：不要傾倒,# 4,滴一滴沉淀于巧克力平皿和血平皿,上下吸取10次以上混勻沉淀,# 5,CO2中孵育72小時,# 6,將一大滴沉淀滴在玻片上。不要涂開。自然干燥并進行革蘭染色。如見到大量多形核白細胞則強烈支持感染,

38、# 7,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,腦脊液培養(yǎng)標本的采集,采集時間：懷疑腦膜炎時應立即采集腦脊液，最是在應用抗生素之前采集腦脊液。采集方法：腰穿采集腦脊液3～5ml（最少1ml，最佳>5ml），分裝到3個無菌小瓶中（各1 ～ 2ml）。 第一管用于細菌培養(yǎng)! 用于細菌和病毒檢測時腦脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸桿菌檢測腦脊液量不少于2m

39、l。,腦脊液培養(yǎng)標本的采集,標本采集后注入無菌管/小瓶中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。腦膜炎奈瑟菌離體后會迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標本應立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會影響檢出率。,腦脊液標本的運送,常溫立即送檢，實驗室收到標本后應立即接種。腦脊液標本送檢的理想時間為15分鐘內(nèi)，半小時送檢是可接受的，如果送檢時間超過1小時，則會影響結(jié)果，在結(jié)果報告時，在備注處注

40、明此情況。如不能及時送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時，請勿使用血培養(yǎng)瓶）。,六、穿刺液標本的采集,穿刺液類標本的采集,穿刺液培養(yǎng)標本包括胸水、腹水、心包液、關節(jié)液、鞘膜液等穿刺液培養(yǎng)標本。采集時間：一般在用抗生素等抗菌藥物治療之前，或在停止使用抗菌藥物之后2 ～ 3d采集標本。,穿刺液類標本的采集,采集方法： ①無菌操作穿刺抽取標本或外科手術采集標本； ②標本采集量應＞1ml。 胸腔積液、腹水可抽

41、取10 ml, 心包液、關節(jié)液等可抽取2 ～ 5 ml 。 ③標本采集后注入無菌小瓶或無菌試管中送檢，也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。,七、分泌物采集規(guī)范,感染傷口的采樣方法,組織活檢：金標準，可定量培養(yǎng)，用手術刀或穿刺取深部組織活檢穿刺抽吸：膿腫，≥1ml試子,⑥膿，吸取物或組織標本主要病原菌：金黃色葡萄球菌，化膿鏈球菌，其他β溶血鏈球菌，銅綠假單胞菌，其他革蘭陰性桿菌。非病原菌：凝固酶陰性葡萄球菌，少量的棒

42、狀革蘭陽性桿菌,用酒精消毒傷口 周圍皮膚組織活檢是金標準，穿刺抽吸次之最差的標本是拭子,#1,接種血平皿和麥康凱平皿如果是吸取物或組織，進行革蘭染色，將重要結(jié)果通知臨床醫(yī)生,#2,#3,銅綠假單胞菌,中孵育48小時,#4,對1或2種重要病原菌進行鑒定&藥敏試驗,金黃色葡萄球菌為主,β溶血鏈球菌,肺炎克雷伯菌,混合的2種腸道革蘭陰性桿菌：2種均報告；,當檢出3種或更多病原菌時，報告“混合菌叢”并描述性列出假單胞

43、菌，金葡菌，變形桿菌，腸道革蘭陰性桿菌等。,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,#5,分泌物樣本,標本的選擇更大程度上依賴于感染的程度和性質(zhì)而不是可疑的病原體。對大多數(shù)開放傷口，采集前應先去除表面菌群。除非有滲出物，干燥、結(jié)痂傷口一般不做培養(yǎng)。閉合膿腫應取滲出物和膿腫壁標本。開放膿腫處理同開放傷口。燒傷傷口應在廣泛清洗和清創(chuàng)術后采集培養(yǎng)。建議取活檢標本

44、，傷口表面定量培養(yǎng)不一定有意義。代表性的標本應采自病灶活動區(qū)域或基底部而不僅僅是膿液。,分泌物采集規(guī)范,1、對開放性病灶的采集：如眼結(jié)膜膿性分泌物、扁桃體、外耳道、手術后切口、導管治療感染、瘺管內(nèi)膿液、生殖道分泌物等均屬于開放性病灶。應先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌，去除舊的分泌物，用滅菌拭子采集病灶深部或邊緣的標本分泌物，也可取感染部位下的組織送檢。也可對滲出液作厭氧培養(yǎng)。開放病灶不能做厭氧培養(yǎng)。,分泌物采集規(guī)范,2、閉鎖性膿腫：如

45、淋巴膿腫、肺膿腫、肝膿腫、腹腔膿腫、盆腔膿腫等，對封閉的膿腫常采用穿刺或引流的的方法采樣，應在用藥前采集，應注意膿液的氣味、性狀、顏色注意厭氧菌存在的可能。不能及時送檢應應用輸送培養(yǎng)基。,分泌物采集規(guī)范,3、燒傷傷口：清創(chuàng)，出現(xiàn)滲出液后以拭子用力采集，僅作需氧培養(yǎng)。也可送檢活檢組織標本。4、膿皰或水皰：酒精消毒使之干燥，對于患兒用23號針頭挑破膿皰，拭子采集膿皰液和基底部標本。5、標記：不要只寫“分泌物”標記標本，應有專門的描述和解

46、剖來源。注明滲出液來自開放傷口還是閉合傷口。,八、生殖道標本采集規(guī)范,,CO2孵育72h T—M培養(yǎng)基上尋找淋球菌，血平皿上尋找酵母菌,# 2,血平皿& Thayer-Martin平皿,# 1,# 1,接種Thayer-Martin培養(yǎng)基&革蘭染色,將拭子在玻片上滾動制成一個細胞厚度的涂片；尋找“線索細胞”,C. 懷孕35-37周的孕婦陰道或肛拭子,營養(yǎng)肉湯中孵育過夜血平皿上次代培養(yǎng)檢測B群鏈球菌,# 1,# 2

47、,CO2中孵育48小時,,D. 女性的陰道拭子,# 1,血平皿上尋找酵母菌，T-M培養(yǎng)基上尋找淋球菌,,,,,革蘭染色輔助診斷細菌性陰道病,# 1,,# 2,30 min內(nèi)將拭子置于0.5ml生理鹽水中檢測滴蟲,T-M培養(yǎng)基上的淋球菌,血平皿上的酵母菌,A. 女性的子宮頸或肛拭子,B. 男性的尿道拭子,④生殖道標本培養(yǎng)主要病原菌：淋病奈瑟菌，滴蟲，酵母菌&女性的細菌性陰道病綜合征，孕婦攜帶的B群β溶血鏈球菌,© E

48、llen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,生殖道標本的采集方法,推薦使用男性或女性專用拭子。男性前列腺：用肥皂和水清洗陰莖頭，通過直腸按摩前列腺，用無菌拭子收集液體或使液體進入無菌管內(nèi)。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2 ～ 4cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20s。,生殖道標本的采集方法,女性陰道：擦除過多的分泌物和排出液，用2支無菌拭子從陰道穹隆部黏膜處獲取分泌物。 1支需要涂

49、片,1支拭子做培養(yǎng)。女性尿道：患者排尿1h后采集，拭去尿道口的滲出物，用拭子通過陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集尿液。宮頸：用無潤滑劑的擴陰器使宮頸可見，用拭子從宮頸上拭去黏液和分泌物，丟掉拭子，用新的無菌拭子緊帖宮頸內(nèi)道輕輕采樣。后穹窿：送抽吸液。,九、其他標本的采集運送規(guī)范,⑦咽部標本培養(yǎng) 主要病原菌：A群β溶血鏈球菌。 選擇性報告：溶血隱秘桿菌,拭子擦取咽

50、部和扁桃體。不要碰觸舌頭和面頰。,將拭子擦拭血平皿（羊血或馬血）的1/5區(qū)域,在第一區(qū)貼相鄰的兩紙片：復方磺胺和桿菌肽,# 1,,拭子,# 2,在燭缸中37°C孵育過夜并檢查平板；若陰性，繼續(xù)孵育過夜總孵育時間＝48小時,# 5,# 3,分區(qū)畫線3或4區(qū),接種環(huán),,,,,,β溶血菌落， > 0.5 mm, 對復方磺胺耐藥，對桿菌肽敏感＝A群鏈球菌（觸酶陰性）,# 6,桿菌肽& SXT 紙片,# 4,,,

51、,,桿菌肽,,復方磺胺,PYR陽性可確證A群鏈球菌,# 7,,© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution,不要報告咽炎中非致病菌：金黃色葡萄球菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌卡他莫拉菌α溶血鏈球菌所有革蘭陰性桿菌所有酵母菌,報告結(jié)果： 1+ to 4+ A群β溶血鏈球菌 或1+ to 4+ 非A群β溶血鏈球菌 或未檢出β溶血鏈球菌,#

52、 8,# 9,,#1,#2,常規(guī)：接種沙氏平皿和Mycobiotic培養(yǎng)基。 30° C 空氣孵育四周。對于皮膚癬菌：接種Mycobiotic和DTM培養(yǎng)基組織，皮膚刮取物或指甲：將一小塊完整的標本插入瓊脂表面,#3,重要的真菌：組織活檢，痰，腦脊液，血培養(yǎng)皮膚癬菌：皮膚刮片，指甲刮片，根部的頭發(fā)不要研磨組織：使用解剖刀將其切成小塊,#4,⑧真菌培養(yǎng) 重要

53、病原菌：新型隱球菌，人芽囊原蟲 ，皮膚癬菌，和 其他真菌（考慮標本來源和病人情況）,拭子僅用于酵母菌的分離－接種血平皿和沙氏平皿,© Ellen Jo Baron 2008; Use with proper attribution,#6,將標本研于一滴10%KOH，加蓋玻片后鏡檢真菌,接種后7天內(nèi)每日觀察平皿，之后每周兩次,光滑菌落＝酵母菌毛狀菌落＝絲狀真菌,用