體外受精與胚胎培養(yǎng)

1、體外受精與胚胎培養(yǎng),,受精的概念受精是兩性配子（卵母細(xì)胞和精子）相融合形成一個(gè)新的細(xì)胞—合子的過(guò)程。它標(biāo)志著胚胎發(fā)育的開(kāi)始，是一個(gè)具有雙親遺傳特征的新生命的起點(diǎn)。受精的過(guò)程1.精子穿過(guò)卵母細(xì)胞外層的顆粒細(xì)胞2.精子結(jié)合并穿透卵母細(xì)胞的透明帶3.精卵融合4.卵子激活5.精子激活6.原核形成,精子入卵的過(guò)程,受精過(guò)程中涉及的反應(yīng)1.頂體反應(yīng)：精子質(zhì)膜與頂體外膜之間發(fā)生點(diǎn)狀融合，并釋放出頂體酶的過(guò)程。頂體酶有很強(qiáng)的消化和

2、水解蛋白的作用，從而使精子順利的穿過(guò)透明帶。2.皮質(zhì)反應(yīng)：精子接觸卵黃膜后，皮質(zhì)顆粒膜與卵黃膜發(fā)生融合，皮質(zhì)顆粒中物質(zhì)被釋放到卵黃膜與透明代之間的卵周隙中。皮質(zhì)反應(yīng)引發(fā)了以下兩個(gè)子反應(yīng)（防止多精入卵機(jī)理）：透明帶反應(yīng)：皮質(zhì)顆粒中的類(lèi)胰蛋白酶作用于透明帶，使透明帶發(fā)生改變，從而是其它精子不能再穿過(guò)他。卵質(zhì)膜反應(yīng)：由于皮質(zhì)反應(yīng)結(jié)果，卵質(zhì)膜補(bǔ)充了皮質(zhì)顆粒膜而發(fā)生了重組，重組后的卵黃膜可以防止其余精子入卵。,原核期胚胎的質(zhì)量評(píng)估體外授精后

3、16~18 h, 此時(shí)合子處于原核期1.Scott 提出的“合子評(píng)分系統(tǒng)”，其根據(jù)核仁數(shù)目和分布以及原核形態(tài)將其分為4級(jí),Z1:2PN并列相連, 大小一致; 核仁大小、數(shù)目相同, 線(xiàn)性排列于原核連接處; 核仁數(shù)量為3~7個(gè)。Z2: 2PN并列相連, 大小一致; 核仁大小、數(shù)目相同, 分散排列于原核中; 核仁數(shù)量為3~7個(gè)。Z3: 2PN并列相連, 大小一致; 核仁數(shù)目相同或不同, 大小均勻或不均勻; 其中一個(gè)原核中核仁呈線(xiàn)性排列于

4、原核連接處, 而另一個(gè)原核中, 核仁分散不規(guī)則; 核仁數(shù)量為3~7個(gè)。Z4: PN大小不等或分離。,按照此方法評(píng)分, Z1、Z2級(jí)合子通常會(huì)發(fā)育為較優(yōu)質(zhì)的胚胎, 移植此類(lèi)胚胎會(huì)得到較高的妊娠率; Z3級(jí)合子發(fā)育為低質(zhì)胚胎, 種植潛力低下; Z4級(jí)合子通常預(yù)示之后的胚胎染色體異常, 一般不用于移植。,2.Tesarik提出的“原核評(píng)分系統(tǒng)，其根據(jù)原核形態(tài)與胚胎發(fā)育的相關(guān)性將合子分為6型,其中0型代表正常合子, 1~5型代表各種不規(guī)則形態(tài)

5、的合子，且0型合子的臨床妊娠率高于非0型合子的臨床妊娠率。,0. 每個(gè)原核核仁數(shù)目大于3個(gè)，兩個(gè)原核核仁數(shù)目相差小于3，核仁在原核內(nèi)的排列方式一樣1. 兩個(gè)原核核仁數(shù)目相差大于32. 兩個(gè)原核中至少有一個(gè)原核核仁數(shù)目小于7，且核仁散在排列3. 兩個(gè)原核中至少有一個(gè)核仁數(shù)目大于7，且核仁均為極性排列4. 兩個(gè)原核中至少有一個(gè)核仁數(shù)目小于35. 兩個(gè)原核核仁排列方式不一致,異常受精的類(lèi)型,1.單原核2.未見(jiàn)原核3.多原核（多精

6、受精）通常異常受精的核子很難發(fā)育到囊胚，經(jīng)常在卵裂期發(fā)生阻滯。,卵裂及囊胚形成,卵裂：受精卵經(jīng)過(guò)多次連續(xù)迅速的細(xì)胞分裂，形成許多小細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程。每次卵裂產(chǎn)生的子細(xì)胞稱(chēng)卵裂球。卵裂的主要特點(diǎn)：細(xì)胞周期短，細(xì)胞分裂間期（G1期）非常短甚至沒(méi)有；每次卵裂，核物質(zhì)重新合成增長(zhǎng)，細(xì)胞質(zhì)沒(méi)有增長(zhǎng)，但其理化性質(zhì)發(fā)生變化，因而卵裂球幾乎不生長(zhǎng)即迅速地進(jìn)行下次分裂，卵裂球體積越來(lái)越小，一旦核質(zhì)比例達(dá)到平衡，細(xì)胞分裂速度開(kāi)始減慢。卵裂后形成的大量小

7、細(xì)胞，是便于以后形態(tài)發(fā)生中細(xì)胞的重排、胚層和器官原基的形成和胚體體形的塑造。,卵裂的過(guò)程,卵裂率容易受到培養(yǎng)環(huán)境的影響, 一般認(rèn)為在一個(gè)穩(wěn)定的培養(yǎng)條件下, 受精后第1日應(yīng)達(dá)到2細(xì)胞期, 第2日應(yīng)達(dá)到4~6細(xì)胞期, 第3日達(dá)到7~9-細(xì)胞期，第5日形成囊胚。發(fā)育遲緩或生長(zhǎng)過(guò)快的胚胎種植率通常很低。我們通常采用第3-5天的胚胎進(jìn)行移植。,卵裂類(lèi)型1.根據(jù)卵裂球的數(shù)目是否按幾何基數(shù)增加，分為同時(shí)卵裂和異時(shí)卵裂。哺乳動(dòng)物（包括人類(lèi)）的受精卵

8、從一開(kāi)始就是異時(shí)卵裂。異時(shí)卵裂導(dǎo)致出現(xiàn)了我們常見(jiàn)的3細(xì)胞、5細(xì)胞、7細(xì)胞胚胎。2.根據(jù)卵黃的含量和分布，分為等分全裂、不等全裂以及不全裂。由于哺乳動(dòng)物幾乎不含有卵黃，其卵裂方式為等分全裂。,哺乳動(dòng)物卵裂的特點(diǎn),(1)哺乳動(dòng)物旋轉(zhuǎn)型全卵裂：第1次為經(jīng)線(xiàn)裂，其后的2個(gè)卵裂球各采不同的卵裂方式。(2)早期卵裂球的卵裂不同步，可產(chǎn)生奇數(shù)細(xì)胞的胚胎。(3)卵裂速度緩慢。,D3（8細(xì)胞）胚胎的質(zhì)量評(píng)估,1、胚胎發(fā)育速度2、胚胎中卵裂球的形

9、態(tài)卵裂球的形態(tài)是指胚胎中每個(gè)細(xì)胞的大小是否一致、形狀是否相似。優(yōu)先挑選大小和形狀一致差異非常小的胚胎，這些胚胎受孕的幾率較大。3、胚胎中碎片的多少胚胎的碎片是胚胎發(fā)育過(guò)程中產(chǎn)生的“廢物”，一般認(rèn)為與胚胎的質(zhì)量及發(fā)育潛能有關(guān)。通常認(rèn)為碎片體積少于胚胎體積5%的胚胎是最美的，也稱(chēng)為優(yōu)質(zhì)胚胎，25%以下是可以用的，稱(chēng)為有效胚胎，碎片體積大于50%的胚胎一般會(huì)被淘汰。胚胎經(jīng)過(guò)三天的發(fā)育，部分用于移植或冷凍。胚胎發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的動(dòng)態(tài)過(guò)程,

10、 應(yīng)結(jié)合從取卵到移植各時(shí)期的胚胎評(píng)分情況, 建立連續(xù)的胚胎評(píng)分體系, 以選出合適的胚胎進(jìn)行移植。,通過(guò)記錄胚胎的細(xì)胞數(shù)，胚胎細(xì)胞球的均勻程度，胚胎碎片，以及胚胎是否有小空泡、多核等指標(biāo)對(duì)胚胎進(jìn)行分級(jí)?？蓪?細(xì)胞胚胎分為4級(jí)：,I級(jí)胚胎：細(xì)胞大小均等，透亮，胞質(zhì)無(wú)顆粒，碎片0%-5%。 II級(jí)胚胎：細(xì)胞大小略不均，胞質(zhì)有顆?，F(xiàn)象，碎片6%-20%。 III級(jí)胚胎：細(xì)胞大小明顯不均，胞質(zhì)有明顯顆?，F(xiàn)象，碎片21%-50

11、%。 IV級(jí)胚胎：細(xì)胞大小嚴(yán)重不均，胞質(zhì)有嚴(yán)重顆粒現(xiàn)象，碎片>50%。,囊胚發(fā)育的評(píng)級(jí),根據(jù)囊胚腔的大小和是否孵化,將囊胚的發(fā)育分為6個(gè)級(jí)別：,根據(jù)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ICM）和滋養(yǎng)層細(xì)胞（TE）的細(xì)胞數(shù)量和緊密程度，各分為A、B、C三個(gè)級(jí)別：,囊胚培養(yǎng)具有篩選胚胎的作用，有助于提高臨床妊娠率。所謂囊胚培養(yǎng)，就是延長(zhǎng)胚胎培養(yǎng)時(shí)間，它通常形成于卵子受精后的第5-7天，過(guò)程中，一些劣質(zhì)甚至有缺陷的胚胎會(huì)被自然淘汰，因此，相對(duì)優(yōu)質(zhì)的胚胎就會(huì)脫穎