質(zhì)粒提取常見問題及解決辦法

1、質(zhì)粒提取常見問題及解決辦法質(zhì)粒提取常見問題及解決辦法涂布棒在酒精蘸一下，然后燒一下，能不能保證把所用的菌燒死涂布棒在酒精蘸一下，然后燒一下，能不能保證把所用的菌燒死參考見解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即時殺菌。蘸了酒精參考見解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即時殺菌。蘸了酒精后再燒一小會，燒的是酒精而不是涂布棒。建議涂布棒還是干燒較長時間后，后再燒一小會，燒的是酒精而不是涂布棒。建議涂布棒還是干燒較長時間后，冷卻了再涂。

2、同時作多個轉(zhuǎn)化時，應(yīng)用幾個涂布棒免得交叉污染。冷卻了再涂。同時作多個轉(zhuǎn)化時，應(yīng)用幾個涂布棒免得交叉污染。原先測序鑒定沒有問題的細菌，原先測序鑒定沒有問題的細菌，37℃37℃搖菌后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒大小或序列出現(xiàn)異常搖菌后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒大小或序列出現(xiàn)異常參考見解：這種情況出現(xiàn)的幾率較小，常出現(xiàn)在較大質(zhì)?；虮容^特殊的序參考見解：這種情況出現(xiàn)的幾率較小，常出現(xiàn)在較大質(zhì)粒或比較特殊的序列中。解決辦法：列中。解決辦法：1、降低培養(yǎng)溫度，在、降低培養(yǎng)溫度，在202

3、0～25℃25℃下培養(yǎng)，或室溫培養(yǎng)可明顯減少發(fā)生概率。下培養(yǎng)，或室溫培養(yǎng)可明顯減少發(fā)生概率。2、使用一些特殊菌株，如、使用一些特殊菌株，如SureSure菌株，它缺失了一些重組酶，如菌株，它缺失了一些重組酶，如recrec類等，類等，使得質(zhì)粒復(fù)制更加穩(wěn)定。使得質(zhì)粒復(fù)制更加穩(wěn)定。3、質(zhì)粒抽提有一個酶切不完全的原因就是溶液、質(zhì)粒抽提有一個酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的中的NaOHNaOH濃度過高造濃度過高造成的，請大家注意一下成的，請大家注

4、意一下!【有兩種方法可以在提質(zhì)粒前判斷菌生長是否正常：有兩種方法可以在提質(zhì)粒前判斷菌生長是否正常：是否正確。是否正確。4、堿裂解不充分：使用過多菌體培養(yǎng)液，會導致菌體裂解不充分，可減少、堿裂解不充分：使用過多菌體培養(yǎng)液，會導致菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加溶液的用量。對低拷貝數(shù)質(zhì)粒，提取時可加大菌體用量并加倍菌體用量或增加溶液的用量。對低拷貝數(shù)質(zhì)粒，提取時可加大菌體用量并加倍使用溶液，可以有助于增加質(zhì)粒提取量和提高質(zhì)粒質(zhì)量。使用溶

5、液，可以有助于增加質(zhì)粒提取量和提高質(zhì)粒質(zhì)量。5、溶液使用不當：溶液、溶液使用不當：溶液2和3在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁，應(yīng)置于在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁，應(yīng)置于37℃37℃保溫保溫片刻直至溶解為清亮的溶液，才能使用。片刻直至溶解為清亮的溶液，才能使用。6、吸附柱過載：不同產(chǎn)品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的質(zhì)粒量、吸附柱過載：不同產(chǎn)品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的質(zhì)粒量很大，請分多次提取。若用富集培養(yǎng)基，例如很大，請分多次提取。若

6、用富集培養(yǎng)基，例如TBTB或2YT2YT，菌液體積必須減少，菌液體積必須減少若質(zhì)粒是非常高的拷貝數(shù)或宿主菌具有很高的生長率，則需減少質(zhì)粒是非常高的拷貝數(shù)或宿主菌具有很高的生長率，則需減少LBLB培養(yǎng)液體積。培養(yǎng)液體積。7、質(zhì)粒未全部溶解、質(zhì)粒未全部溶解(尤其質(zhì)粒較大時尤其質(zhì)粒較大時)：洗脫溶解質(zhì)粒時，可適當加溫或：洗脫溶解質(zhì)粒時，可適當加溫或延長溶解時間。延長溶解時間。8、乙醇殘留：漂洗液洗滌后應(yīng)離心盡量去除殘留液體，再加入洗脫緩沖液。