質(zhì)粒提取常見問題解析

1、質(zhì)粒提取常見問題解析[在此處鍵入]可能原因方案建議質(zhì)?？截悢?shù)低更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體。大腸桿菌老化建議涂布平板培養(yǎng)后，挑選新菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)。菌體中無質(zhì)粒有些質(zhì)粒本身不能在某些菌種中穩(wěn)定存在，經(jīng)多次轉(zhuǎn)接后有可能造成質(zhì)粒丟失。另外，檢查篩選用抗生素使用濃度是否正確。堿裂解不充分菌體培養(yǎng)液使用過量會(huì)導(dǎo)致菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加溶液的用量。對(duì)低拷貝數(shù)質(zhì)粒，提取時(shí)可加大菌體用量并加倍使用溶液。吸附柱過載不同產(chǎn)品中吸附柱吸附能

2、力不同，如果需要提取的質(zhì)粒量很大，建議分多次提取。如果用富集培養(yǎng)基，例如TB或2YT，菌液體積必須減少；若質(zhì)粒是非常高的拷貝數(shù)或宿主菌具有很高的生長率，則需減少LB培養(yǎng)液體積。溶液使用不當(dāng)溫度較低時(shí)可能出現(xiàn)渾濁，最好置于37℃保溫片刻直至溶液清亮才能使用。質(zhì)粒未全部溶解洗脫溶解質(zhì)粒時(shí)，建議適當(dāng)加溫或延長溶解時(shí)間。乙醇?xì)埩羝匆合礈旌髴?yīng)離心盡量去除殘留液體，再加入洗脫緩沖液。洗脫液加入位置不當(dāng)洗脫液建議加在硅膠膜中心部位以確保洗脫液會(huì)完全