海島棉gbarbadensel.莖尖再生體系的建立及農桿菌介導抗蟲基因bt;sati轉化研究

1、新疆農業(yè)大學碩士學位論文海島棉（Gbarbadense L.）莖尖再生體系的建立及農桿菌介導抗蟲基因（Bt;SATI）轉化研究姓名：翁琴申請學位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：曲延英20070501A b s t r a c tI n t h i s e x p e r i m e m ，X i n H a i l 6 ，X i l l } I a i 2 0 ，K 一2 2 2 a n d9 7 0 0 6 a s t h e

2、仃a n s f o m a t i o na c c e p t e r s ，I 芏l 仃I ) d u c tr e s i s t a mi I l s e c tg e n e i nc o t t o na p e xb yA g m b a c t e r i 姍一m e d i a t e d ．T 1 1 I D u g hs t u d i e s o n i 1 1 n u e n c ef a c t o r s

3、 o f s h o o t c u l t u r e a n d 仃a I l s f o m a t i o I l ，e s t a b l i s h n l e m o f r e g e n e r a 瞳i o ns y s t e m f o rc o t t o nt r a n s f o n n a t i o n ．t I l es t u d y c a I lo 任h t e c l l l l i c a

4、 ls u p p o n ．T h e m a i l l r c s u l t so f t l l er e s e a r c h a r e g i v e n b e l o w i n g ：1 ．E s 協(xié)b l i s t l I n e mo f r e g e n e r a t i o ns y s t e m f o r c o t t o n ．S o a l 【s e e di nE t h y l A

5、l c o h o l f o r 3 0s e c ，s o a k s e e d i n1 0 ％H g C l 2s o l u t i o n f o r 3 0 m i n ．S l o s ht h es o l u t i o nC o n t i n u e ．R e m o v e s o l u t i o na 1 1 dr i n s es e e d4 X i ns t e r i l i z e d i n

6、w a t e L L e a v es e e di nf i n a lw a t e r a b o u t1 2 - 1 6 h o l l r s ．S q u e e z es e e d so u to f m e s e e dc o a ta n d c u l t u r e o n t o l ／2 M S B 5m e d i 啪t o g e m l i n a t e0 - 3d a y s ，a t2 5

7、- 2 8 ．R e m o v i n g t l l es e e dc o a tp i o rt og e 徹i n a t i o nr e d u c e sc o n t a I n i n a t i o na n de a s yt 0i n o c u l a t i o n ．．T h e n c u l t I l r c n I ef o u rV a r i e t y o fc o t t o na p e

8、 xo n t oM S B sm e d i 砌w i md i 丘b n t h o n n o n e s ．A m o n g9 d i 丘b r e m c o m b i n a t i o n s o fh o r m o n e s ，6 一B A 0 ．5 m g 幾+ N A A O ．1 m g ／La n d1 ／2 M S B 5 + o ．1 m g ，LI B A c o m b i n e d 、Ⅳe r

9、 cm eb e s tf o rt l l eg e n e r a t i o n ．T h er e s u hs h o w e d ，w h e n 也ec o n o ns h o o ta p e x i s i n d u c e d b u d ，虹坨d i f f 色r e I 垃eb e t 、v e e ng e n e t y p c s d o n ’td i s t i n c t ．A n dt h ew

10、 a y c o 仕o ns h o o ta p e xi s i n d l l c e db u d d e r e c t l yi sb e t t e rm e t h o d ．2 ．C o I l s 仇l c t i o no f t l l e 咖s g e n i c s y s t e m o f c o t t o ns h o o t a p e xA c c o r d i n g t os t I l d

11、 i e so n t h es t e r i l i z a t i o n c o n c e n t r a t i o no fC e f ，t l l ea s c e n a i n m e n t o f K a l ls c r e e l l i n g p r e s s u r e ，a I l dt h ee f f e c tf 砬t o r so f 仃a n s f ．o m 舭q u e n c e ，

12、m e 仃a n s g e n i cs y s t e m 塒t l l爿g ，D 6 口c 陀，f “小m 朋咖c 耙珊w a Sc o n s t f u c t e d ：t h es h o o ta p e x 謝m o u tp r e —c u l t u r e ds h o u l db ei n f c c t e d2 0 - 3 0 m i ni n4 9 陽施c 地r f “肼m 所咖c 把瑚誦m0 D 6

13、 0 0 = 0 ．8 ，c o —c u h i V a t e d 4 8 - 7 2 h o u 璐，a I l ds c r e e n c d 、v i t h2 0 0 m g ／LC e f f o rs t e r i l i z i n g 爿g r D 6 口c 比，f 聊zf D 肌琶7 缸f P 玎s ，l5 0 m g ／LK 觚f o rh i g h e s t s e l e c t i n g r e

14、s i s t 肌tb l l d ．1 k t m s f o r I I l a t i o nr a t eo f E H A l 0 5 i sh j g I l e r t l l a l lL B A 4 4 0 4 ．3 ．1 伽I s g e n i cp l a n t sw e r e t e s t e db y P C RT h e r c s u ho f e l e c 咖p h o r e s i so f

15、 P C R o f r e s i s t a n t p l a n t w 夠t h a ts o m e p l a l l t sg c t t l l es 鋤el i n e 船t h e p o s i t i v ec o n Ⅱo l 所( 1 0 8 0b p ) ．1 1 l et r a n s f o 徹a t i o n m t e i sO ．7 ％．T r 鋤s g e n i cp l 強t so f

16、曰fo b 詛i n e dw e r e 掣a R e d a I l dm a k e “g r o wi no r d c r t ot e s t i n gi t so nn e x ts t e p ．T I l er e s u h so fP C R 鋤a I y s i ss h o w e dt l l a t t 1 1 e B r g e n ei n t h eT - D N Ah a d b e e ni n