解角蛋白微生物的選育及角蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、該研究從腐爛的羊毛中篩選出一株具有降解角蛋白能力的L<,4>菌株,經(jīng)檢測(cè)初步印象為芽孢桿菌.通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)L<,4>菌株的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果在含3﹪可溶性淀粉,2﹪雞毛粉,0.5﹪Na<,2>HPO<,4>,0.0375﹪KH<,2>PO<,4>,0.01﹪MgCl<,2>,0.01﹪CaCl<,2>,0.4NaCl,初始pH為7.5的培養(yǎng)基中,于28℃,120轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下,培養(yǎng)48小時(shí),產(chǎn)生的胞外角蛋白酶活力最高,其肽酶活力可

2、達(dá)4.5U/ml,角蛋白酶活力為269.1U/ml.L<,4>菌株所產(chǎn)生的胞外角蛋白酶經(jīng)過(guò)硫銨鹽析,Sephadex G-75凝膠過(guò)濾,DEAE-cellulose 52離子交換,Sepharose 4B凝膠過(guò)濾等色譜層析得到純化,經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)呈現(xiàn)單一條帶.角蛋白酶分子量為149KD,由四個(gè)分子約為37.5KD的亞基組成,用等電聚焦電泳測(cè)得其等電點(diǎn)為7.76,以紙層析法初步確認(rèn)該酶為高甘露糖型糖蛋白.該角蛋白酶在以酪蛋白為底物

3、時(shí),最適作用溫度為50℃,最適pH為7.0,其Km值為3.13mmol/L,Vmax為6.44×10<'-3>mmol/L·s<'-1>.在以自制的角蛋白溶液為底物時(shí),該酶最適作用溫度為40℃,最適pH為7.0,其Km值為1.88mmol/L,Vmax為2.72×10<'-2>mmol/L·s<'-1>.該酶受鄰啡羅啉和EDTA的抑制,可視為一種含Zn<'2+>的金屬蛋白酶.L<,4>菌株產(chǎn)生的角蛋白酶可以酶解羽毛粉,剝離羊毛表面的角質(zhì)