植物基因組dna提取步驟

1、植物基因組 植物基因組 DNA DNA 提取實(shí)驗(yàn)操作步驟 提取實(shí)驗(yàn)操作步驟1 取植物新鮮組織約 取植物新鮮組織約 100 100 mg mg 或干重組織約 或干重組織約 30 30 mg mg，加入液氮充分研磨。 ，加入液氮充分研磨。（植物細(xì)胞有細(xì)胞壁,液氮可以讓細(xì)胞冷凍起來(lái),變得很脆,這樣容易破細(xì)胞壁。同時(shí),液氮的超低溫可以大大降低酶活性,防止降解。注：1、液氮的溫度是-196℃，不要凍傷自己的手，帶上手套。2、用一個(gè)保溫杯，大一點(diǎn)的

2、，把液氮取出來(lái)放在保溫杯里，蓋上蓋子。3、然后用液氮將研磨棒和研缽預(yù)冷。4、將樣品快速放入研缽中，快速研磨，在液氮揮發(fā)完 之前再加入液氮，一定不要讓液氮揮發(fā)完或者樣品呈現(xiàn)那種黏糊的狀態(tài)，這樣樣品中 DNA 容易降解。5、等到樣品呈現(xiàn)細(xì)粉末狀態(tài)了基本就可以了，用藥勺把樣品迅速舀到1.5ml 離心管里 。）2 將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有 將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有 700 700 μL 65 65℃預(yù)熱緩沖液 ℃預(yù)熱緩沖液

3、 GP1 GP1 的離心 的離心管中（實(shí)驗(yàn)前在預(yù)熱的 管中（實(shí)驗(yàn)前在預(yù)熱的 GP1 GP1 中加入巰基乙醇，使其終濃度為 中加入巰基乙醇，使其終濃度為 0.1% 0.1%），迅速顛倒 ），迅速顛倒混勻后，將離心管放在 混勻后，將離心管放在 65 65℃水浴 ℃水浴 20 20 min min，水浴過(guò)程中顛倒離心管以混合樣品數(shù) ，水浴過(guò)程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。 次。（水浴時(shí)間依實(shí)驗(yàn)具體情況而定，看樣品裂解情況，具體看裂解液變得清澈透

4、明為止）3 加入 加入 700 700 μL 氯仿，充分混勻， 氯仿，充分混勻，12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13,400×g）離心 ）離心 5 min min。注：若提取富含多酚或淀粉的植物組織，可在第 3 步前，用酚：氯仿/1:1 進(jìn)行等體積抽提。4 小心的將上一步所得水層上相轉(zhuǎn)入一個(gè)新的離心管中，加入 小心的將上一步所得水層上相轉(zhuǎn)入一個(gè)新的離心管中，加入 700 700 μL 緩沖 緩

5、沖液 GP2 GP2，充分混勻。 ，充分混勻。5 將混勻的液體轉(zhuǎn)入吸附柱 將混勻的液體轉(zhuǎn)入吸附柱 CB3 CB3 中， 中，12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13,400×g）離心 ）離心 30 30 s，棄掉廢液。 棄掉廢液。（吸附柱容積為 700μL 左右，可分次加入離心。）6 向吸附柱 向吸附柱 CB3 CB3 中加入 中加入 500 500 μL 緩沖液 緩沖液 GD GD（使用前請(qǐng)先

6、檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13,400×g）離心 ）離心 30 30 s，倒掉廢液，將吸附柱 ，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 CB3 放入收集管中。 入收集管中。7 向吸附柱 向吸附柱 CB3 CB3 中加入 中加入 600 600 μL 漂洗液 漂洗液 PW PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13

7、,400×g）離心 ）離心 30 30 s，倒掉廢液，將吸附柱 ，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 CB3 放入收集管中。 入收集管中。8 重復(fù)操作步驟 重復(fù)操作步驟 7。9 將吸附柱 將吸附柱 CB3 CB3 放回收集管中， 放回收集管中，12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13,400×g）離心 ）離心 2 min min，倒 ，倒掉廢液。將吸附柱 掉廢液。將吸附柱 CB3 CB3 置于室溫放

8、置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR 等）實(shí)驗(yàn)。10 10 將吸附柱 將吸附柱 CB3 CB3 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 50-200 μL 洗脫緩沖液 洗脫緩沖液 TE TE，室溫

9、放置 ，室溫放置 2-5 2-5 min min，12,000 12,000 rpm rpm（~13,400 ~13,400×g）離心 ）離心2 min min，將溶液收集到離心管中。 ，將溶液收集到離心管中。注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50 μL，體積過(guò)小影響回收率。洗脫液的 PH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5范圍內(nèi)（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍），pH