富硒古尼蟲(chóng)草菌發(fā)酵條件優(yōu)化及活性成分研究.pdf

1、硒(Se)是人體必需微量元素之一，是含硒酶的重要組分，具有多種生理功能。而我國(guó)處于低硒區(qū)，硒的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充顯得尤為重要。由于蟲(chóng)草菌具有硒元素的有機(jī)轉(zhuǎn)換能力，富硒后，其提取物硒多糖兼有多糖和硒的雙重活性，然而有關(guān)古尼蟲(chóng)草菌絲體富硒及其硒多糖的研究鮮有報(bào)道。本論文研究了古尼蟲(chóng)草菌的耐硒和富硒特征，以富硒率和生物量為指標(biāo)進(jìn)行液體發(fā)酵條件優(yōu)化，從富硒古尼蟲(chóng)草菌絲體中提取多糖并進(jìn)行結(jié)構(gòu)和抗氧化活性分析。
　　固體平板培養(yǎng)觀察富硒古尼蟲(chóng)草菌的菌落

2、特征和形態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，固體平板培養(yǎng)耐亞硒酸鈉濃度為5μg/mL，且富硒能夠加快古尼蟲(chóng)草菌絲體的生長(zhǎng)，減慢菌種老化速度。菌落整體為白色，菌落四周長(zhǎng)滿(mǎn)較短的白色絨狀致密菌絲;分生孢子無(wú)隔膜，呈擬卵圓形、橢圓形，平滑、均勻的粘附在產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)上。
　　采用原子熒光法測(cè)定富硒菌絲體中的硒含量，通過(guò)單因素及正交試驗(yàn)優(yōu)化液體發(fā)酵條件。結(jié)果表明:液體發(fā)酵耐亞硒酸鈉濃度為7μg/mL;最優(yōu)發(fā)酵條件為:蔗糖濃度6％，蛋白胨濃度0.6％，KH2PO4

3、0.25％，MgSO40.20％，培養(yǎng)基初始pH6.0，培養(yǎng)溫度25℃，接種量8％。在此條件下，富硒古尼蟲(chóng)草生物量可達(dá)11.657g/L，富硒率可達(dá)78.33％。為探究生物富硒對(duì)古尼蟲(chóng)草功效成分和營(yíng)養(yǎng)成分的影響，測(cè)定了基礎(chǔ)組和富硒組中化學(xué)成分的含量，結(jié)果顯示富硒古尼蟲(chóng)草菌四種營(yíng)養(yǎng)和三種功效成分含量高于基礎(chǔ)古尼蟲(chóng)草，且多糖含量達(dá)到了10.39％。
　　分別從基礎(chǔ)組和富硒組菌絲體中提取、分離和純化得分子量均一的大分子多糖，分別命名為C

4、CPS-Ⅱ（基礎(chǔ)組）和SeCPS-Ⅱ（富硒組）。結(jié)果為:SeCPS-Ⅱ和CCPS-Ⅱ中硒含量分別為17.89μg/g和2.01μg/g。采用氣相色譜、高碘酸氧化、Smith降解和核磁共振等分析表明，兩種多糖的單糖組成種類(lèi)一樣，主要由葡萄糖組成，但單糖含量不同;CCPS-Ⅱ糖殘基呈α異頭構(gòu)型，且由α(1→4)葡萄糖構(gòu)成多糖骨架，SeCPS-Ⅱ糖殘基主要呈α異頭構(gòu)型，還含有部分β異頭構(gòu)型，且主要由α(1→4)葡萄糖構(gòu)成多糖骨架，部分β-型糖

5、苷鍵構(gòu)成多糖支鏈。通過(guò)紅外光譜對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，初步推斷SeCPS-Ⅱ含有亞硒酸酯的特征吸收峰。使用旋光儀、剛果紅試驗(yàn)和X-射線(xiàn)衍射儀對(duì)CCPS-Ⅱ和SeCPS-Ⅱ進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果顯示富硒對(duì)其多糖結(jié)構(gòu)有一定影響。
　　通過(guò)體外抗氧化試驗(yàn)評(píng)價(jià)CCPS-Ⅱ和SeCPS-Ⅱ?qū)ψ杂苫那宄芰?。?dāng)多糖濃度為3.0mg/mL時(shí)，與CCPS-Ⅱ相比，SeCPS-Ⅱ?qū)αu自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧陰離子自由基清除率分別提高了21