畢業(yè)論文鯉魚不同組織過氧化物酶的活性測定

1、1鯉魚不同組織過氧化物酶的活性測定 鯉魚不同組織過氧化物酶的活性測定摘要： 摘要：本文應用愈創(chuàng)木酚為底物，利用分光光度法測定反應液的吸光度，以吸光度的變化速率來表征過氧化物酶的活力。通過試驗得到鯉魚腎臟、心臟、肌肉三種不同組織過氧化物酶酶活性分別為 312.6、287.1、158.1 u/g，并對鯉魚不同組織過氧化物酶的活性進行了比較與分析。關鍵詞： 關鍵詞：過氧化物酶；愈創(chuàng)木酚；酶活力；分光光度法Determining Peroxi

2、dase Activity Of Different Tissues From Cyprinus CarpioChongqing Normal university Biology science 2003 Li ZhengyangTutor : Xu PingAbstract : It was using guaiacol as substrate and enzyme activity was sho

3、wed by the OD value variety in the reaction liquid , and the catalytic activity peroxidase was measured by spectrophotometer . And bye the way comparisoning and analysising peroxidase activity of different tissues from c

4、yprinus carpio. In addition, the relevant data of Peroxidase ( POD ) activity is that: the kidney is 10.42 U/g.min, the cardiac muscle is 9.57 U/g.min, and the flesh is 3.43 U/g.min. The end ,repetition test is carried o

5、ut to confirm the accuracy and precision of the method .Key words : peroxidase ; aniline ; enzyme activity；spectrophotometer 過氧化物酶（peroxidase，POD，EC 1.11.1.7）是一種生物氧化中的末端氧化酶[1]，能夠分解生物體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物需氧脫氫后產(chǎn)生的，對機體有害物質(zhì)。它廣泛的存在于生物各個組織

6、器官，在肝臟和血液中含量較高，具有一定的解毒功能。 POD 作為細胞內(nèi)重要的組成成分，具有許多非常重要的生理功能。由于其成分和結構的復雜性，同功酶的多樣性，以及多基因編碼特點，造成對其功能的認識尚不全面。POD 在食品、醫(yī)藥、環(huán)保和化工等行業(yè)中已得到廣泛應用。POD 獨特的溫度穩(wěn)定性和優(yōu)良的反應性使其成為同類酶中極其重要的一種：環(huán)保部門應用 POD 處理工業(yè)廢水；將 POD 應用到醫(yī)療診斷試劑盒，生產(chǎn)其產(chǎn)品的性能與質(zhì)量均超過了傳統(tǒng)的 H

7、RP-I（轉錄調(diào)節(jié)蛋白抗體[2]）試劑盒；在樹脂生產(chǎn)工業(yè)中 POD 成功的代替了傳統(tǒng)合成工業(yè)30.1mol/L 的 pH7.2 的磷酸緩沖液，于冰浴中研磨。再用紗布過濾，取濾液用冷凍離心機在 10060r/min 的條件下離心 10min。沉淀棄去，取上清液，即得到酶原液。給鯉魚的心臟、腎臟和肌肉三個不同組織的酶原液分別貼上標簽，置于冰箱中冷藏備用[1]。1.2.2 酶活力測定向比色杯中加入 0.008mol/L 的 H2O2 溶液

8、0.05ml，0.1mol/L 的 pH7.0 的磷酸緩沖液 2.8ml，0.018mol/L 的愈創(chuàng)木酚 0.05ml，于 25℃的水浴中恒溫 10min，迅速加入待測酶液 0.1ml，以磷酸緩沖液代替酶液作空白對照，反應液總體積 3ml。用分光光度計在 436nm 下測定溶液的光吸收值（A） ，每 30s 讀一次，共讀 3min。重復步驟 3 和 4 五次[4]。 1.2.3 計算以每半分鐘A436變化0.01為1個活力單位。以

9、時間為橫坐標，A436值為縱坐標進行線性作圖（或用統(tǒng)計方法求得回歸方程） ，進而計算A436的變化速率（?A436·min-1）來定義酶活力單位(1u)，最后計算鯉魚不同組織每克鮮重樣品中過氧化物酶POD活力的大小，即用?A436·min-1·g-1Fw表達 過氧化物酶活性[4]。ΔA436nm/min=ΔA 樣/min-ΔA 空白/min過氧化物酶的活力單位（U/g.min）=ΔA436nm/min

10、15;15÷(4.8×0.1×0.01×0.5 ) ×30[其中，15 為提取酶液總體積（ml） ，4.8 為鮮重（g） ，0.1 為測定時提取酶液體積（ml）,0.5 為測定時反應時間(t)，30 為酶液稀釋倍數(shù).] 2、結果 、結果 2.1 2.1 實驗結果 實驗結果2.1.1 繪制鯉魚三種組織過氧化物酶的光吸收值曲線圖：以 A436 值為縱坐標，記錄時刻 T 為橫坐標。表