高速逆流色譜分離純化何首烏等中藥有效成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(High Speed Counter current Chromatography)，簡稱HSCCC，是由日本Yoichio Ito(伊東洋一郎)博士首先研制開發(fā)的一種新型色譜技術(shù)<'[1]>，是利用螺旋管方向性與高速行星式運(yùn)動(dòng)相結(jié)合產(chǎn)生的一種獨(dú)特的流體動(dòng)力學(xué)現(xiàn)象，使樣品中的各組分在相對(duì)移動(dòng)的互不相溶的兩相(一相為固定相，另一相由恒流泵連續(xù)輸入，為流動(dòng)相)中實(shí)現(xiàn)高效的接觸、混合、分配和傳遞，并按照分配系數(shù)的不同依次洗脫而獲

2、得分離的一種完全的液液色譜<'[2]>。與其它色譜技術(shù)不同的是它不需要任何固態(tài)載體，因而避免了分離樣品與固態(tài)載體表面的相互作用而造成的失活、變性、污染及不可逆吸附等不良情況，它還具有高效、快速、上樣量大、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，所以特別適合于天然產(chǎn)物的分離與純化<'[3]>。經(jīng)過近30年的發(fā)展，隨著其理論與技術(shù)的日益發(fā)展與完善，HSCCC已在生物、醫(yī)藥、食品、材料、農(nóng)業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在中藥有效成分的分離純化領(lǐng)域已成為最有優(yōu)

3、勢的分離分析方法之一。 本文應(yīng)用HSCCC，采用優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)常用中藥何首烏、青蒿、茯苓、金果欖中的有效成分進(jìn)行了分離純化，經(jīng)HSCCC分離所得化合物的純度由HPLC檢測均大于95％，化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振氫譜(<'1>H-NMR)與碳譜(<'13>C-NMR)得到了鑒定。為上述中藥的藥理研究與開發(fā)、中藥及其制劑的鑒別以及質(zhì)量控制提供了參考。 l.HSCCC分離純化何首烏中的蒽醌類化合物建立了高速逆流色譜法分離純化何首烏中

4、有效成分的新方法。從200 mg何首烏粗提物Ⅰ中，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：8：2，v/v)的上相為固定相，下相為流動(dòng)相，分離純化得到20.6 mg大黃素(Ⅰ)和23.7 mg大黃素甲醚(Ⅱ)。從120 mg粗提物Ⅱ中，采用乙酸乙酯-甲醇-水(5：0.1：5，v/v)體系，分離純化得到5.1 mg何首烏乙素(Ⅲ)，15.3 mg 2，3，5，4'-二苯乙烯-2-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)，8.2 mg大黃素甲醚-8-O-β-D-

5、葡萄糖苷(Ⅴ)和6.7 mg決明葸酮-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅵ)。經(jīng)高效液相色譜分析，各組分的純度均在95％以上。其化學(xué)結(jié)構(gòu)由<'1>H-NMR和<'13>C NMR鑒定。 2．HSCCC分離純化青蒿中的有效成分建立了高速逆流色譜法分離純化中藥青蒿中莨菪亭和三種黃酮類有效成分的新方法。兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，固定相為(5：5：3.5：6.5，v/v)體系的上相，以(5：5：3.5：6.5，v/v)和(5：5：

6、5.5：4.5，v/v)體系的下相為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。從320 mg青蒿粗提物中一步分離純化得到21.2 mg莨菪亭(Ⅰ)，17.8 mg 5，3’，4’-三羥基-3，6，7-三甲氧基黃酮(Ⅲ)，23.5 mg 5，3’-二羥基-3，6，7，4’-四甲氧基黃酮(Ⅳ)，8.4 mg 5-羥基-3，6，7，3’，4’-五甲氧基黃酮(Ⅴ)。經(jīng)高效液相色譜分析，各組分的純度均在95％以上。其化學(xué)結(jié)構(gòu)由其<'1>H-NMR和>'13>C-NMR

7、數(shù)據(jù)鑒定。 3．HSCCC分離純化茯苓中的三萜類成分建立了高速逆流色譜法分離純化中藥茯苓中五種三萜類成分的新方法。兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，固定相為(5：5：6：4，v/v)體系的上相，以(5：5：6：4，v/v)和(5：5：7：3，v/v)體系的下相為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。一次從426 mg茯苓粗提物中分離得到9.1 mg去氫土莫酸，5.4 mg 3β-羥基-16α-乙酰氧基-羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-

8、21-酸，4.7 mg豬苓酸C，9.3 mg茯苓酸，7.8 mg去氫依布里酸。所得化合物純度均較高，均在95％以上，其結(jié)構(gòu)經(jīng)<'1>H-NMR與<'13>CNMR得到了鑒定。 4．HSCCC分離純化金果欖中的四種非生物堿類成分應(yīng)用高速逆流色譜法，從360 mg金果欖樣品粗提物中分離純化出了19.5 mg古倫賓(Ⅰ)，32.7 mg 24-epi-羅漢松甾酮A(Ⅱ)，16.5 mg 20-羥基蛻皮素(Ⅲ)。HSCCC溶劑體系為乙酸