中國對蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過敏反應(yīng)及其機理研究.pdf

1、對蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對食用者的安全健康存在著潛在的威脅，而致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過敏原的種類以及含量。對于易過敏人群而言，食用對蝦等富含過敏原的食物易引發(fā)全身性過敏反應(yīng)，出現(xiàn)腸道黏膜過敏癥狀以及體內(nèi)一些生理指標(biāo)的變化。鑒于此，本研究擬以具有較高經(jīng)濟價值的特色物種中國對蝦為對象，建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的ICR小鼠過敏模型，結(jié)合間接ELISA測定小鼠血清中過敏原特異性IgE抗體水平以驗證過敏模型的成功建立，通過HE/甲苯

2、胺藍(lán)染色以及免疫組化等手段探討該蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機理，最后通過測定小鼠相關(guān)臟器比重、抗氧化酶活性以及過敏指示酶的變化，表明了機體內(nèi)發(fā)生過敏的過程與一些生理指標(biāo)變化的相關(guān)性。本研究旨在為中國對蝦的攝入性過敏及體內(nèi)相關(guān)的免疫調(diào)控提供相關(guān)理論依據(jù)，同時對于臨床評估中國對蝦過敏原的潛在致敏性具有一定的實際參考意義。主要研究結(jié)果如下:
　　1、采用腹腔免疫中國對蝦肌肉蛋白方法，建立針對該蝦蛋白過敏的ICR小鼠模型。通過SDS

3、-PAGE電泳和AlphaView SA3.4.0電泳圖像分析軟件分析，初步推測了中國對蝦肌肉蛋白中可能含有的過敏原種類;建立小鼠過敏模型之后，采用間接ELISA方法檢測小鼠血清中過敏原特異性IgE水平在激發(fā)期不同時間點的變化，并通過各劑量組OD值和對照組OD值的橫向比較，結(jié)果大多為2.1倍以上，證明該模型已經(jīng)成功建立，可用于后續(xù)實驗研究。
　　2、采用各染色方法及免疫組化方法探討中國對蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機理。通過H

4、E染色對小腸腸道形態(tài)學(xué)觀察初步證明了蝦蛋白致敏組小鼠腸道發(fā)生炎癥且導(dǎo)致上皮損傷;對小腸肥大細(xì)胞進行甲苯胺藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組小鼠腸道肥大細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的脫顆粒現(xiàn)象，細(xì)胞完整率顯著降低;免疫組化檢測小腸中相關(guān)T細(xì)胞（CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞）以及IgA+漿細(xì)胞的數(shù)量，結(jié)果顯示該蝦蛋白致敏個體內(nèi)小腸內(nèi)這些細(xì)胞陽性率顯著高于對照組;提示蝦肌肉蛋白引發(fā)腸道黏膜免疫反應(yīng)是通過IgE介導(dǎo)的速發(fā)型過敏反應(yīng)以及T淋巴細(xì)胞依賴性延遲型過敏反

5、應(yīng)協(xié)同作用，并伴有B淋巴細(xì)胞向IgA+漿細(xì)胞持續(xù)分化來實現(xiàn)。
　　3、研究中國對蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠體內(nèi)相關(guān)臟器比重及酶的變化。采用酶活試劑盒測定抗氧化酶(SOD、POD、CAT、GSH-Px、GST)和NOS/iNOS活性;使用雙抗夾心ELISA方法檢測PLA2的濃度;對Ca2+-ATPase mRNA相對表達(dá)量的檢測采用RT-PCR方法。對各蝦蛋白劑量組和對照組小鼠肝臟、腎臟、脾臟比重比較發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組小鼠肝、腎發(fā)生了不同程

6、度的萎縮，且隨著注射劑量加大而萎縮程度越嚴(yán)重，而脾臟則發(fā)生腫大，且隨著注射劑量加大而腫大程度越嚴(yán)重;通過測定小鼠肝、腎、脾及血清中這幾種抗氧化酶的活性發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組個體內(nèi)這些酶的活性明顯升高;而測定小鼠體內(nèi)肝、腎、脾和/或血清中三種過敏特征酶的變化發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組個體內(nèi)肝、腎、脾及血清中NOS/iNOS活性明顯提高、PLA2濃度顯著增加，而肝臟、腎臟、脾臟內(nèi)Ca2+-ATPase mRNA相對表達(dá)量下降;提示過敏的發(fā)生過程與機體內(nèi)