茶葉硒蛋白的分離純化、結(jié)構(gòu)、有機(jī)硒形態(tài)及其抗氧化活性研究.pdf

1、硒蛋白不僅是有機(jī)硒的主要存在形態(tài)，也是微量元素硒的主要功能形態(tài)，具有抗氧化、抗腫瘤、提高機(jī)體免疫等多種生物活性。茶葉硒蛋白（TSPs）是從富硒茶中提取的硒蛋白，目前國內(nèi)外尚無對茶葉硒蛋白硒形態(tài)及抗氧化活性研究的報道。本論文對茶葉硒蛋白分離純化工藝、結(jié)構(gòu)、有機(jī)硒形態(tài)和抗氧化活性進(jìn)行了研究，得到如下結(jié)果：
　?。?）茶葉硒蛋白的分離純化：①評價不同提取溶劑（水、乙醇、鹽溶液和堿液）對茶葉硒蛋白蛋白提取率和品質(zhì)的影響，超聲輔助法鹽提茶葉

2、硒蛋白的蛋白提取率為44.67％，稍低于超聲輔助法堿提和醇提茶葉硒蛋白的蛋白提取率，但超聲輔助法鹽提的茶葉硒蛋白具有較佳的品質(zhì)和較高的抗氧化活性；②采用單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化超聲輔助法鹽提茶葉硒蛋白的提取工藝，得到最佳工藝：NaCl濃度0.75 mol/L、液固比40 mL/g、超聲時間120 min、提取溫度50℃。此條件下，蛋白實(shí)際提取率為63.68%。
　?。?）茶葉硒蛋白結(jié)構(gòu)分析：采用紫外、紅外和圓二色譜等技術(shù)分析 DEA

3、E Sepharose FF純化的茶葉硒蛋白（TSPs1、TSPs2和TSPs3）發(fā)現(xiàn)：①茶葉硒蛋白紫外吸收特征峰，在211 nm處有很強(qiáng)的單峰和在280 nm處有弱的肩峰；②圓二色譜技術(shù)分析茶葉硒蛋白二級結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，TSPs1主要為無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)（69.8%）；TSPs2主要為α-螺旋結(jié)構(gòu)（64.9%）；TSPs3以α-螺旋（33%）和β-折疊（45.4%）結(jié)構(gòu)為主。
　?。?）茶葉硒蛋白有機(jī)硒形態(tài)分析：采用 HPLC-ICP-MS

4、聯(lián)用技術(shù)研究茶葉硒蛋白有機(jī)硒形態(tài)，茶葉硒蛋白粗品和純品中均含硒代半胱氨酸和硒代甲硫氨酸，且硒代半胱氨酸是茶葉硒蛋白有機(jī)硒的主要形態(tài)；作為有機(jī)硒的補(bǔ)充劑，茶葉硒蛋白粗品優(yōu)于純品。
　?。?）茶葉硒蛋白抗氧化活性研究：i不同溶劑提取的茶葉硒蛋白均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且其抗氧化活性：鹽提的TSPs>水提的TSPs>醇提的TSPs>堿提TSPs；ii茶葉硒蛋白具有較強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化活性強(qiáng)于不富硒的普通茶葉蛋白，且其抗氧化活性與其