乙酰半胱氨酸改善煙草提取物誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株EGFR-TKI耐藥的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　靶向治療是目前有相應(yīng)位點(diǎn)突變的非小細(xì)胞肺癌患者的一線治療方案，有吸煙史的EGFR突變陽性非小細(xì)胞肺癌患者較無吸煙史患者具有較差的預(yù)后，吸煙與EGFR-TKI（Epithelial growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）耐藥密切相關(guān)。本研究旨在探索煙草提取物（cigarette smoke extract,CSE）與肺腺癌EGFR-TKI耐

2、藥的潛在機(jī)制，乙酰半胱氨酸（N-Acetyl-L-Cysteine,NAC）能否改善CSE誘導(dǎo)的PC-9、A549細(xì)胞吉非替尼耐藥及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分：將PC-9、A549細(xì)胞分為吉非替尼空白對(duì)照組、10%CSE組，MTT方法檢測CSE對(duì)PC-9、A549細(xì)胞吉非替尼敏感性的影響，western blot方法檢測CSE處理后EGFR/AKT信號(hào)通路蛋白的表達(dá)，激光共聚焦掃描顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)方法直接或間接觀

3、察CSE對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。
　　第二部分：將PC-9、A549細(xì)胞分為空白對(duì)照組、10%CSE組、10%CSE+NAC組、Gefitinib組、10%CSE+Gefitinib組、10%CSE+NAC+Gefitinib組，MTT方法檢測NAC對(duì)CSE誘導(dǎo)的PC-9、A549細(xì)胞吉非替尼耐藥的影響，western blot方法檢測NAC對(duì)CSE上調(diào)的EGFR/AKT磷酸化水平的影響，激光共聚焦掃描顯

4、微鏡及流式細(xì)胞術(shù)方法直接或間接觀察NAC對(duì)CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高的作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測NAC對(duì)肺腺癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　MTT檢測結(jié)果顯示：PC-9細(xì)胞吉非替尼空白對(duì)照組、10%CSE組、10%CSE+NAC組的IC50分別為0.0671±0.0131μM、0.9268±0.2042μM、0.0519±0.0018μM；A549細(xì)胞吉非替尼空白對(duì)照組、10%CSE組、10%CSE+NAC的 IC50分

5、別為22.11±1.13μM、55.51±3.40μM、31.01±1.25μM，兩組細(xì)胞中，10%CSE組IC50值明顯高于空白對(duì)照組（P均＜0.01），而經(jīng)NAC處理后IC50較10%CSE組明顯降低（P均＜0.01）。
　　Western blot檢測顯示煙草提取物可以激活EGFR/AKT信號(hào)通路，10%CSE組pY1068、pY1173、p-AKT水平較空白對(duì)照組明顯上調(diào)，且10%CSE+Gefitinib組相應(yīng)磷酸化蛋白

6、水平較10%CSE組變化不明顯，而10%CSE+NAC+Gefitinib較10%CSE組、10%CSE+Gefitinib組EGFR/AKT磷酸化蛋白表達(dá)明顯降低。
　　激光共聚焦技術(shù)及流式細(xì)胞術(shù)均顯示煙草提取物暴露后細(xì)胞內(nèi)活性氧水平明顯升高，而乙酰半胱氨酸能夠降低CSE上調(diào)的細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示PC-9細(xì)胞空白組、10%CSE組、10%CSE+NAC組細(xì)胞凋亡率分別為：(6.24±0.22)%，(7

7、.51±1.11)%，(19.46±3.79)%； A549細(xì)胞空白組、10%CSE組細(xì)胞、10%CSE+NAC組凋亡率分別為：(4.71±1.27)%，(5.34±2.91)%，(8.83±1.54)%。兩株細(xì)胞中，10%CSE組細(xì)胞凋亡率較空白對(duì)照組均無明顯差異（P＞0.05）；PC-9細(xì)胞中，與10%CSE組相比，10%CSE+NAC組凋亡率明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在A549細(xì)胞中P值大于0.05，兩組差異不