微流控電泳芯片在單細(xì)胞分析中的應(yīng)用.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要微流控分析系統(tǒng)恤TAS)在生物細(xì)胞領(lǐng)域的發(fā)展引起了廣泛的關(guān)注。微流控芯片的微米尺寸的通道更適合單細(xì)胞樣品的引入，操縱，反應(yīng)，分離和檢測(cè)。因此將這些功能集成在微流控芯片上成為當(dāng)前分析的一個(gè)熱點(diǎn)。本論文用微流控電泳芯片對(duì)單細(xì)胞分析進(jìn)行一些研究。主要分三部分:1.微流控電泳芯片電化學(xué)檢測(cè)人單個(gè)肝癌細(xì)胞中的谷骯甘膚ell.人單個(gè)活細(xì)胞中過氧化物酶的測(cè)定。111.Bi和CN對(duì)活細(xì)胞內(nèi)酶活性的影響.第一部分用微流控電泳芯

2、片電化學(xué)檢測(cè)的方法測(cè)定了人單個(gè)肝癌細(xì)胞中的谷‘膚甘肚。我們選擇用電泳緩沖液代替常用的PBS作為細(xì)胞懸浮液，用壓力將單個(gè)細(xì)胞導(dǎo)入芯片的雙T交叉點(diǎn)，用毛地黃皂普化學(xué)蝕孔和外加電場(chǎng)相結(jié)合的溶膜方式，利用金汞齊電極對(duì)谷肌甘膚良好的選擇性檢測(cè)得到單個(gè)細(xì)胞中谷肌甘膚唯一的電泳峰。實(shí)現(xiàn)了芯片毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)單細(xì)胞的快速分離優(yōu)勢(shì)及選擇性檢測(cè)。然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)細(xì)胞中谷耽甘膚的含量進(jìn)行了定量，測(cè)得人單個(gè)肝癌細(xì)胞中谷膚甘肚含量與文獻(xiàn)值一致。第二部分建立了

3、一種微流控電泳芯片電化學(xué)檢測(cè)人單個(gè)活細(xì)胞內(nèi)髓過氧化物酶(MPO)的方法。我們先用毛地黃皂普將細(xì)胞蝕孔，然后通過電遷移將蝕孔后的單個(gè)中性粒細(xì)胞導(dǎo)入芯片雙T交叉點(diǎn)并貼壁。緩沖液中底物H2Q和H202通過細(xì)胞膜上的微孔擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞，被胞內(nèi)MPO催化反應(yīng)生成電活性產(chǎn)物BQ.BQ通過細(xì)胞膜上微孔擴(kuò)散回到細(xì)胞周圍的溶液中，在細(xì)胞周圍形成BQ區(qū)帶。再加電泳電壓將此區(qū)帶遷移到分離通道的檢測(cè)端并用碳纖維微盤電極檢測(cè)。得到的電泳峰的峰面積對(duì)應(yīng)于活細(xì)胞內(nèi)MP

4、O的含量。通過同一個(gè)細(xì)胞溶膜后電泳峰面積及標(biāo)準(zhǔn)溶液電泳峰的峰面積可以對(duì)活細(xì)胞內(nèi)MPO進(jìn)行定量。測(cè)得人單個(gè)中性粒細(xì)胞內(nèi)MPO含量與細(xì)胞提取液中測(cè)得值一致。第三部分研究了Br一和CN一對(duì)人單個(gè)活中性粒細(xì)胞內(nèi)MPO活性的影響。Br一和CN一對(duì)胞內(nèi)MPO影響非常明顯。2.5x102mo1ILBr一對(duì)中性粒細(xì)胞中MPO刺激40min后其活性降為原來(lái)的32%s5x1了moltLCM對(duì)中性粒細(xì)胞中MPO活性的抑制作用更顯著，40min后其活性降為原來(lái)

5、的7.8%d主題詞:微流控芯片，毛細(xì)管電泳，電化學(xué)檢A9，單細(xì)胞分析原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位一論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，木論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。劉本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由木人承擔(dān)。論文作者簽名丁粉食尹日期:pCA關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明木人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的