2–（苯甲?；┄C6–（取代胺基）嘌呤衍生物設(shè)計(jì)、合成及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：目前，嘌呤類小分子Stat3抑制劑的研究還不十分廣泛，且具體信號通路研究還不明確，因服藥劑量大，有很多副作用，給患者帶來不適。S3I-V4-01為已報道的嘌呤類小分子Stat3抑制劑，對Stat3蛋白及相關(guān)腫瘤細(xì)胞有一定的抑制作用，但是其構(gòu)效關(guān)系和作用信號通路還不明確，因此，有待于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。以嘌呤類小分子Stat3抑制劑S3I-V4-01作為先導(dǎo)化合物，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)簡化和修飾，S3I-V4-01為2,6,9-三取代嘌呤化合

2、物，但并未明確報道嘌呤母核三個位置取代基的構(gòu)效關(guān)系，以及具體各個位置對抗腫瘤細(xì)胞增殖所起的作用，具有較大的改造空間。因此，簡化S3I-V4-01結(jié)構(gòu)，去除嘌呤9號位的取代基，得到新化合物A24，同種條件下，兩種化合物對A431細(xì)胞的抗增殖結(jié)果顯示，A24比S3I-V4-01有更好的抑制效果。主要研究嘌呤母核2號位和6號位的取代，結(jié)合藥物設(shè)計(jì)的基本原理，合成了2,6–二取代嘌呤類衍生物58個，結(jié)構(gòu)鑒定正確后，進(jìn)行抗腫瘤活性研究，結(jié)合抗腫瘤

3、活性的檢測結(jié)果總結(jié)其構(gòu)效關(guān)系，為后續(xù)深入研究打下基礎(chǔ)。
　　方法：(1)實(shí)驗(yàn)所用原料為2-氨基-6-氯-9H-嘌呤，第一步原料與嗎啡啉反應(yīng)合成2-氨基-6-(嗎啉基)-9H-嘌呤，接著嘌呤環(huán)的2號位與取代的苯甲酰氯進(jìn)行?；磻?yīng)得到目標(biāo)化合物A1-24，將這些化合物進(jìn)行抗腫瘤活性初步篩選，得到部分活性較好的代表性化合物。參考初步篩選出活性較好的化合物結(jié)構(gòu)，固定嘌呤2號位取代基，繼續(xù)探討嘌呤6號位不同結(jié)構(gòu)的胺基取代，得到目標(biāo)化合物B1

4、-11、C1-11、D1-4，E1-4，再進(jìn)行抗腫瘤活性篩選。所合成的目標(biāo)化合物均通過ESI-MS、1H NMR和13C NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)。(2)抗腫瘤活性研究實(shí)驗(yàn)中，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（MTT）的方法，在化合物濃度為10μM的條件下，檢測化合物對人體正常心肌細(xì)胞的毒性，篩選出毒性較小的化合物。再次通過MTT方法檢測化合物對Stat3密切相關(guān)的腫瘤細(xì)胞株的抑制作用，即探討化合物對表皮癌細(xì)胞A431、肺癌細(xì)胞A549的抑制作用，篩選出

5、具有良好抗腫瘤活性的化合物。篩選出的代表性化合物進(jìn)一步通過細(xì)胞遷移-劃痕、細(xì)胞集落形成、免疫印跡靶點(diǎn)檢測、細(xì)胞凋亡、熒光素報告基因等后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加深入的活性研究。
　　結(jié)果:(1)本論文合成了58個類嘌呤衍生物（A1-24、B1-15、C1-11、D1-4，E1-4）。所合成的化合物均通過ESI-MS、1H NMR和13C NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。(2)化合物抗腫瘤活性研究結(jié)果顯示：在化合物濃度為10μM的條件下，化合物A15和A1

6、8對表皮癌細(xì)胞A431，E2和E3對肺癌細(xì)胞A549具有良好的抑制作用。其中， A15對表皮癌細(xì)胞A431的IC50為0.707μM。(3)通過對化合物A15更深入的生物活性研究得知，在同種濃度下，化合物A15比先導(dǎo)化合物S3I-V4-01抑制效果更好。先導(dǎo)化合物 S3I-V4-01為作用于 Stat3的抑制劑，對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的IC50為64μM，而通過免疫印跡,熒光素報告基因方法檢測得知，化合物A15可以有效抑制EG