植物乳桿菌ZDY2013表層蛋白及其益生特性的初步探究.pdf

1、乳酸菌是一類有益于宿主健康的微生物，主要通過在腸道中的定植發(fā)揮益生作用。乳酸菌對上皮細(xì)胞的黏附、定植作用有助于其抑制病原菌在腸道中的定植，增強(qiáng)其與腸道細(xì)胞之間的信號交流，提高機(jī)體免疫力。乳酸菌的黏附性是評價其作為益生菌的重要標(biāo)準(zhǔn)，其黏附性與菌體表層蛋白相關(guān)。近些年，分析表層蛋白與乳酸菌黏附性及其與益生性的相關(guān)性已成為研究熱點。
　　本文在植物乳桿菌ZDY2013體外抑制幽門螺桿菌機(jī)制的研究基礎(chǔ)上，以Caco-2細(xì)胞為模型，分析了影

2、響乳酸菌黏附的因素（菌體濃度、生長期、環(huán)境pH及表層蛋白），并通過乳酸菌灌胃模型小鼠，分析表層蛋白對乳酸菌在宿主體內(nèi)定植的影響。系統(tǒng)分析了植物乳桿菌ZDY2013表層蛋白對菌體益生性能的影響。
　　結(jié)果表明，植物乳桿菌ZDY2013可以有效抑制幽門螺桿菌，其抑菌圈直徑達(dá)20 mm，尿素酶活性抑制率達(dá)60％。植物乳桿菌ZDY2013有較強(qiáng)的黏附胃腺癌細(xì)胞AGS的能力，能夠通過置換、競爭和排阻的方式抑制幽門螺桿菌黏附于AGS細(xì)胞，幽門

3、螺桿菌黏附率分別降至52.16%、7.35%和10.74%，且競爭為最佳抑制方式。植物乳桿菌ZDY2013可以有效抑制由幽門螺桿菌誘導(dǎo)的TNF-α轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，提高抗炎癥因子IL-10的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。
　　對植物乳桿菌ZDY2013黏附性的研究結(jié)果顯示，乳酸菌濃度、生長期、環(huán)境pH4.0-5.0和表層蛋白均顯著影響菌體黏附力。乳酸菌黏附量隨著菌體濃度增高而增加，在2×108 CFU/mL條件下基本達(dá)到飽和狀態(tài)，且對數(shù)生長期時黏附

4、力達(dá)到最高，在去除菌體表層蛋白后，黏附量顯著下降（P＜0.05）。結(jié)合SDS-PAGE技術(shù)，分離到44 kDa大小的蛋白條帶。通過外源添加該乳酸菌表層蛋白，隨著其添加量增高，黏附性顯著下降（P＜0.05）。體內(nèi)實驗結(jié)果表明，灌胃后乳酸菌在不同腸道中的定植有差異，且隨著灌胃時間而改變；與活性乳酸菌比，去除表層蛋白及熱致死乳酸菌的黏附性均有所下降，與體外實驗結(jié)果具有一致性。
　　進(jìn)一步研究表層蛋白對植物乳桿菌ZDY2013益生性的影響

5、，結(jié)果表明，去除表層蛋白的植物乳桿菌ZDY2013的自凝集、疏水性及耐酸性能均顯著降低（P＜0.01）；耐受人工胃腸液能力亦呈現(xiàn)下降趨勢。在置換、排斥和競爭Caco-2的細(xì)胞粘附實驗中，植物乳桿菌ZDY2013去除表層蛋白后對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌的抑制黏附能力顯著下降（P＜0.01）。黏附受體實驗結(jié)果表明，植物乳桿菌ZDY2013可能與D-甘露糖特異性結(jié)合，導(dǎo)致對Caco-2的黏附量下降；胰蛋白酶（10~30 mg/m