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1、該研究從自然界中分離篩選出一株高產(chǎn)殼聚糖酶的微生物菌株YJO2,經(jīng)鑒定屬于氣單胞菌屬(Aeromonas sp.).通過對(duì)菌株YJO2發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化研究確定其最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基組分為(﹪,w/v):粉末殼聚糖2.0,葡萄糖0.1,NH<,4>NO<,3>1.0,酵母提取物0.5,K<,2>HPO<,4>0.07,KH<,2>PO<,4>0.03,NaCl0.5,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.05,起始pH6.0;最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條
2、件是:500mL錐形瓶培養(yǎng)基裝量為150mL,2.0﹪(v/v)的接種量,30℃,150rpm培養(yǎng)72h.在最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件下,72h時(shí)菌株YJO2發(fā)酵液中殼聚糖酶活力可達(dá)到17.04U/mL,是迄今所見報(bào)道中發(fā)酵液殼聚糖酶活力最高的微生物菌株.該殼聚糖酶是一種誘導(dǎo)型的胞外酶,采用20-70﹪(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級(jí)鹽析、Sephadex G-75凝膠過濾、Q-Qepharose Fast Flow陰離子交換層析對(duì)菌株Y
3、JO2發(fā)酵液中的殼聚糖酶進(jìn)行分離提純,獲得了SDS-PAGE呈單條帶的殼聚糖酶,分子量為66kD.對(duì)該酶進(jìn)行部分酶學(xué)性質(zhì)的研究表明該殼聚糖酶的最適作用溫度和最適反應(yīng)pH分別為50℃和pH5.6,酶活力在pH4.0-9.0范圍內(nèi)和50℃以下時(shí)相對(duì)穩(wěn)定;金屬離子Mn<'2+>對(duì)酶活力有明顯的促進(jìn)作用,Cu<'2+>、Fe<'3+>和Hg<'2+>則對(duì)酶活力具有明顯的抑制作用;最適作用底物為60-93﹪脫乙酰度的殼聚糖;除了能降解殼聚糖,對(duì)膠
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