黃酮類化合物和姜黃素與核酸的相互作用及其分析應(yīng)用的研究.pdf

1、核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子是生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)，他們對(duì)生物的生長(zhǎng)、遺傳、變異等現(xiàn)象都起著重要的決定作用，也與腫瘤的發(fā)生、病毒的感染、射線對(duì)機(jī)體的作用都有重要關(guān)系。 探針技術(shù)是研究核酸和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能、定性、定拿的重要手段，目前已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的前沿課題。本論文主要研究了新的核酸熒光探針，建立了核酸的靈敏分析方法，并探討了熒光探針與核酸間的相互作用機(jī)理和發(fā)光機(jī)理。 論文的第一部分綜述了核酸探針的研究進(jìn)展及維生

2、素分析方法的研究現(xiàn)狀。 論文的第二部分，研究了桑色素-Y<'3+>-CTAB-核酸體系的相互作用及其分析應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，在Tris-HCl緩沖溶液(pH=7.0)中，核酸能使桑色素-Y<'3+>-CTAB體系的熒光有明顯增強(qiáng)，其增強(qiáng)程度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，fsDNA和yRNA的線性范圍分別為5×10<'-3>-4μg/ml和5×10<'-3>-μg/ml，它們的檢出限分別為：1.7和

3、1.5ng/ml。該方法已用于合成樣品的測(cè)定，其結(jié)果令人滿意。機(jī)理研究表明，桑色素-Y<'3+>以靜電引力和CTAB及核酸發(fā)生反應(yīng)，從而在體系中形成一個(gè)大的桑色素-Y<'3+>-CTAB-核酸絡(luò)合物；而同時(shí)CTAB-核酸可以為桑色素-Y<'3+>絡(luò)合物提供良好的疏水環(huán)境，這一環(huán)境具有較低的極性和較大的微粘度，因此降低了桑色素-Y<'3+>和水分子之間的碰撞，減少了因碰撞而導(dǎo)致的體系能量損失，提高了體系的熒光量子產(chǎn)率，使體系的熒光強(qiáng)度大大

4、增強(qiáng)。 論文的第三部分，研究了槲皮素-核酸體系的熒光增強(qiáng)效應(yīng)及核酸的測(cè)定。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素本身熒光很弱，核酸能增強(qiáng)槲皮素的熒光強(qiáng)度。在HMTA-HCl緩沖溶液中(pH=5.5)，核酸能明顯地增強(qiáng)槲皮素的熒光強(qiáng)度。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，增強(qiáng)的熒光強(qiáng)度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系，fsDNA，yRNA和ctDNA的檢出限分別達(dá)到3.5ng/mL，2.6ng/mL和0.78ng/mL。研究指出，該方法的穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便和靈敏

5、度高等特點(diǎn)。該法已用于實(shí)際樣品的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。同時(shí)還探討了核酸與槲皮素之間的相互作用及熒光增強(qiáng)的機(jī)理。 論文的第四部分主要研究了在陽(yáng)離子表面活性劑存在下，核酸對(duì)姜黃素?zé)晒庠鰪?qiáng)作用及其分析應(yīng)用。結(jié)果表明，核酸和CTAB對(duì)姜黃素的熒光具有明顯的增強(qiáng)作用，且該體系的熒光強(qiáng)度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。fsDNA、yRNA和ctDNA的線性范圍分別為5.0x10<'-9>9-1.0x10<'-6>g/mL、5.0x1

6、0<'-9>-10.x10<'-6>g/mL和5.0x10<'-9>-1.0×10<'-6>g/mL。它們的檢出限(S/N=3)分別為0.32，1.4和O.76ng/mL。該法己用于實(shí)際樣品的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。我們對(duì)該體系的作用機(jī)理進(jìn)行了研究，研究認(rèn)為體系中熒光增強(qiáng)的原因有兩點(diǎn)，其一是CTAB-核酸為姜黃素提供了弱極性的疏水微環(huán)境，減少了能量損失而增強(qiáng)了姜黃素的熒光量子產(chǎn)率；其二是體系中形成了三元絡(luò)合物，拉近了分子之間的距離，使姜黃

7、素的特征熒光明顯增強(qiáng)。 論文的第五部分研究了釔-蘆丁-SDBS體系的熒光特性及蘆丁的測(cè)定。研究表明，在堿性的條件下，釔(Ⅲ)能與蘆丁和表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)形成三元絡(luò)合物，該絡(luò)合物有很強(qiáng)的熒光。由此建立了簡(jiǎn)單、快速、靈敏的測(cè)定蘆丁的熒光方法。實(shí)驗(yàn)表明，測(cè)定的最佳條件為：λ<,ex>/λ<,em>=380.0/540.0nm，Y<'3+>(1.5×10<'-4>mol/1)，SDBS(5×10<'-4>mol/1)，

8、pH=9.5的Tris-HCl緩沖溶液1.0ml。線性范圍2×10<'-8>mol/l-2×10<'-6>mol/1；回歸方程為：F=0.7008+2.1632C C(mol/1)(r=0.99809)；檢出限：2.2×10<'-9> mol/l。該測(cè)定方法回收率為96.6-100.7％，結(jié)果令人滿意。該法已用于實(shí)際樣品的測(cè)定，取得了滿意的結(jié)果。 本論文的主要特點(diǎn)： 1．探討了核酸與Y<'3+>-桑色素體系相互作用的機(jī)理

9、，認(rèn)為CTAB和核酸可形成絡(luò)合物，該絡(luò)合物可通過(guò)靜電引力和疏水作用力與稀土配合物形成大的絡(luò)合物，CTAB和核酸為配合物提供了較好的疏水環(huán)境，并減少了與水分子碰撞而生成的能量損失，從而使體系的熒光大大增強(qiáng)。 2．研究指出，在一定條件下，核酸能分別增強(qiáng)槲皮素和姜黃素-CTAB體系的熒光強(qiáng)度，因而提出了兩種測(cè)定核酸的新的熒光技術(shù)，并用于實(shí)際樣品的測(cè)定。該方法具有簡(jiǎn)便快速、靈敏度高等特點(diǎn) 3、研究了釔．蘆?。甋DBS體系的熒光特