對乙酰氨基苯磺酰氟作為氨基酸衍生試劑性能的研究及其在毛細管電泳分離檢測氨基酸中的應(yīng)用.pdf

1、一、對乙酰氨基苯磺酰氟的合成及其氨基酸衍生性能的研究采用一種新的方法合成了一種新的紫外衍生試劑——對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)用來標(biāo)記和測定氨基酸。PAABS-F的摩爾吸光系數(shù)為3.00×10<'4>L·mol<'-1>·cm<'-1>，是常用紫外衍生試劑的三倍。PAABS-F非常穩(wěn)定，便宜，無毒，容易在實驗室合成并能與一級和二級氨基酸快速反應(yīng)。反應(yīng)條件溫和，與氨基酸反應(yīng)后的衍生產(chǎn)物很穩(wěn)定，檢測靈敏度高，且衍生反應(yīng)產(chǎn)率也很高。在

2、室溫?zé)o須避光的條件下存放7天也無其他副產(chǎn)物產(chǎn)生。被PAABS-F標(biāo)記的20種常見氨基酸能在毛細管電泳上成功分離檢測。質(zhì)量檢出下限(S/N=3)為59.3 fmol(色氨酸)-1.70 pmol(組氨酸)。 二、PAABS-F衍生測定酒中的氨基酸建立了一種簡單快速的方法分離檢測用對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)衍生的20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸。在35℃下，20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸與PAABS-F反應(yīng)30 min后在毛細管電泳上分離檢測。緩沖液為

3、pH 9.3的20 mmol/L的硼酸緩沖液，126 mmol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)，8 mmol/L β-環(huán)糊精(β-CD)和20 mmol/L NaCl。分離結(jié)果表明，在利用毛細管電泳分離陰離子物質(zhì)時，β-CD是一種有效的添加劑。在最佳分離條件下，20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸在16 min內(nèi)被成功分離檢測。利用這種方法，分離測定了啤酒和黃酒中的氨基酸。 三、通過控制電滲流采用膠束電動色譜改進氨基酸的分離研究了Mg<'2+>和三種一

4、價陽離子(Na<'+>，Li<'+>和K<'+>)作為緩沖液添加劑以減少電滲流，從而改進膠束電動色譜分離對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)衍生的20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸。研究發(fā)現(xiàn)，隨著陽離子濃度的增加，電滲流(EOF)不斷減小的順序為Mg<'2+>>K<'+>>Na<'+>>Li<'+>。綜合考慮遷移時間、分離度和峰型等因數(shù)，Na<'+>作為緩沖液添加劑是最佳的。采用這種方法，20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸在不到14 min內(nèi)得到了成功的分離。四、氨基酸的