分子光譜法研究蛋白質(zhì)與小分子的相互作用及其分析方法研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是構(gòu)成生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。其作為生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者，擔(dān)負(fù)著新陳代謝、免疫保護(hù)和酶的催化等多種生理功能，并在生物體的生命活動(dòng)和幾乎所有的生物過程中起著至關(guān)重要的作用。因此，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行深入研究，對(duì)于揭示生物體生命活動(dòng)的奧秘具有積極意義，是二十一世紀(jì)臨床醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)和生命科學(xué)等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
　　 血紅蛋白和胰蛋白酶是生物體中兩種重要的蛋白質(zhì)，在生命活動(dòng)中起著不可替代的作用。本論文采用紫外-可見吸收光譜法，分子熒光光譜法等多

2、種光譜技術(shù)，結(jié)合相關(guān)理論，提出了測定血紅蛋白的新方法，同時(shí)研究了血紅蛋白和胰蛋白酶與抗生素類藥物、生物堿及水溶性杯芳烴相互作用的光譜性質(zhì)變化，探討了其相互作用的機(jī)理，求出了一系列熱力學(xué)參數(shù)，判定了熒光猝滅的方式及小分子存在下對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響。這為我們研究和掌握蛋白質(zhì)的含量、結(jié)構(gòu)及功能提供了重要信息，也為臨床醫(yī)學(xué)和新藥開發(fā)等研究提供了有用的數(shù)據(jù)。
　　 本文主要內(nèi)容如下：
　　 1.緒論部分介紹了蛋白質(zhì)定量分析及其與小分

3、子相互作用研究的意義和進(jìn)展?fàn)顩r。
　　 2.第二部分利用四價(jià)鈰離子在酸性條件下具有強(qiáng)氧化性，將血紅蛋白肽鏈上的色氨酸和酪氨酸氧化成具有強(qiáng)熒光的基團(tuán)，大大提高了血紅蛋白的熒光信號(hào)，建立了一種高靈敏、簡單快捷的血紅蛋白含量的測定體系。該體系已用于人血清中血紅蛋白的含量測定。方法的線性范圍是1.0×10-7～8.0×10-7mol·L-1，檢出限為1.0×10-9mol·L-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9％。
　　 3.第三部分采用

4、熒光光譜法和紫外-可見吸收光譜法研究了四環(huán)素、金霉素和氯霉素與血紅蛋白的相互作用。由Stern-Volmer方程及紫外-可見吸收光譜圖得到四環(huán)素、金霉素對(duì)血紅蛋白的熒光猝滅機(jī)理屬動(dòng)態(tài)猝滅，而氯霉素為靜態(tài)猝滅，并求出了結(jié)合常數(shù)。由熱力學(xué)參數(shù)得出四環(huán)素、金霉素與血紅蛋白之間的作用力均主要是疏水作用，而對(duì)于氯霉素則主要是靜電作用。同時(shí)根據(jù)能量轉(zhuǎn)移理論得出熒光給體和受體間的距離r。并由同步熒光光譜研究了藥物存在下血紅蛋白的構(gòu)象變化。
　　

5、 4.第四部分研究了咖啡因和茶堿與胰蛋白酶相互作用的光譜性質(zhì)變化。結(jié)果表明：一、咖啡因、茶堿對(duì)胰蛋白酶的熒光猝滅機(jī)理屬動(dòng)態(tài)猝滅；二、胰蛋白酶與兩種生物堿之間均發(fā)生了能量轉(zhuǎn)移；三、咖啡因、茶堿存在下胰蛋白酶的構(gòu)象發(fā)生了改變。
　　 5.第五部分研究了對(duì)磺酸基杯[4]、杯[6]及杯[8]芳烴與胰蛋白酶相互作用的光譜性質(zhì)變化。結(jié)果表明三種杯芳烴對(duì)胰蛋白酶的猝滅機(jī)理均屬于動(dòng)態(tài)猝滅，作用力均為疏水作用，且作用后胰蛋白酶的構(gòu)象發(fā)生了變化。