新型毛細管電泳方法在藥物分析和蛋白質(zhì)分離中的應用.pdf

1、毛細管電泳(CE)是一種具有高效、快速、進樣少、成本低、污染少、自動化高、分析對象廣等優(yōu)點的分析檢測方法，廣泛地應用在藥物、蛋白質(zhì)分析等領域，已成為現(xiàn)代生命科學的一種非常重要的分離分析技術。在本文的工作中，我們著眼于解決毛細管電泳技術上所面臨的一些問題，如靈敏度不夠高，分析物在毛細管壁的非特異性吸附等問題。我們使用在線富集技術來提高毛細管電泳在藥物分析中的靈敏度，使用表面活性劑涂層方法來抑制蛋白質(zhì)在毛細管管壁的吸附，改善其分離效果。圍繞

2、這些目標本文主要開展以下幾方面的工作： (1)利用毛細管電泳-大體積進樣(CE-LVSS)的方法完成對抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)及其前藥替加氟(TF)的在線檢測。最佳的電泳緩沖液為pH8.0的30mM磷酸鹽溶液。不使用大體積進樣時，5-FU和TF的檢測限(LOD)分別是600.5ng/mL，771.4ng/mL；采用大體積進樣后，其靈敏度提高約兩個數(shù)量級(5-FU和TF的檢測限分別降低到7.9ng/mL，6.5ng/mL

3、)；相對標準偏差％RSD小于5％。與其他報道過的分析5-FU和TF的分析方法相比，該法具有明顯的優(yōu)越性(高靈敏度，高選擇性，分析時間短)，并成功應用于抗腫瘤藥物的商用注射液的定量分析。結(jié)果證明毛細管電泳-大體積進樣是一種簡單、快捷、高選擇和高靈敏的方法。 (2)表面活性劑半永久涂層能有效防止蛋白質(zhì)在毛細管的管壁吸附。但是，由于緩沖液的沖洗致使表面活性劑在管壁脫落，是半永久涂層所面臨的問題。本文提出一種簡單通用的方法來改善表面活性

4、劑半永久涂層的穩(wěn)定性，該方法是在涂層里添加帶相反電荷的表面活性劑。選用雙十二烷基二甲基溴化銨(DDAB)和一種雙子表面活性劑，18-6-18作為半永久涂層，十二烷基硫酸鈉(SDS)作它們的對電荷表面活性劑。SDS可以改變陽離子表面活性劑的堆積參數(shù)P，并從而調(diào)整涂層的穩(wěn)定性。加大SDS在涂層里濃度，涂層的穩(wěn)定性先增大后減小。在最佳的SDS濃度下，可以得到非常穩(wěn)定的涂層，在138kPa高壓沖洗60min，電滲流(EOF)僅改變3.6％。這種

5、SDS增強的涂層在分離蛋白質(zhì)時表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性(日內(nèi)遷移時間的相對標準偏差(RSD)＜1.1％，n=9)。再者，被測蛋白質(zhì)的高分離效果和回收率證明這種涂層具有很強的抑制管壁吸附的能力。最后，我們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離效率，比傳統(tǒng)的EOF值，更能準確的指示涂層的穩(wěn)定性。 (3)提出了一種CE同時分離酸堿性蛋白質(zhì)的簡單方法。該方法利用陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)來構(gòu)建巨型膠束網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)作為偽固定相來同時分離十種