體細胞核移植牛肺臟中印記基因的DNA甲基化狀態(tài)分析.pdf

1、目前，體細胞克隆雖然在多種哺乳動物中獲得后代，但其效率仍然很低，只有2-5％，而且核移植過程中存在孕期流產(chǎn)率高、圍產(chǎn)期死亡率高、新生兒死亡率高及動物出生后發(fā)育異常的問題，這嚴重制約了體細胞核移植技術(shù)在醫(yī)藥行業(yè)、動物生產(chǎn)及拯救瀕危動物等方面的應(yīng)用。在體細胞克隆中，供體核來自高度分化了的體細胞，在分化過程中，體細胞核獲得了高度特異的DNA和組蛋白的表觀遺傳修飾，而發(fā)生在克隆后幾小時內(nèi)供體核的表觀遺傳修飾重編程，決定了克隆胚胎的發(fā)育能力。通常

2、認為，供體核的不完全或異常重編程導(dǎo)致在發(fā)育過程中有重要作用的基因異常表達或沒有表達是克隆效率低下的主要原因。
　　 基因組印記是由等位基因表觀遺傳修飾的不對稱導(dǎo)致的基因表達具有親本選擇性。發(fā)生在DNA‘CG'二核苷酸上的甲基化是基因組印記的一個普遍調(diào)控方式。大多數(shù)印記基因在調(diào)控胚胎生長和出生后的發(fā)育中起重要作用。H19基因與胚胎形成和胎兒生長的調(diào)控有關(guān)；Xist基因是一種非編碼的RNA，在X染色體失活過程中起著關(guān)鍵性作用；Mas

3、h2基因刺激單核滋養(yǎng)層細胞增殖和抑制雙核細胞形成。
　　 為了探求新生死亡的體細胞核移植牛中印記基因的DNA甲基化表觀重編程是否充分，本研究利用亞硫酸氫鹽測序法分析了H19、Xist和Mash2三個基因在出生48 h內(nèi)死亡的克隆牛和正常對照牛肺臟中的DNA甲基化狀態(tài)。實驗結(jié)果顯示，H19基因在體細胞核移植牛中甲基化程度較低，與正常對照組相比差異顯著(P<0.05)，并且9C3個體有3個CpG(第1,2,3位)表現(xiàn)出完全非甲基化；

4、正常對照組中甲基化模式種類復(fù)雜，克隆組中甲基化模式的整齊度較好。Xist基因甲基化程度在體細胞核移植牛和正常對照牛中都較高，且沒有顯著差異。Mash2基因的平均甲基化水平在正常對照與體細胞核移植組中分別為20.04±9.99％和5.55±5.36％，組間差異顯著(P<0.05)，尤其是9C5個體在所檢測的28個CpG位點中甲基化百分比為0.4％。
　　 上述實驗結(jié)果表明與生長發(fā)育密切相關(guān)的印記基因DNA甲基化的不完全重編程在體細